狼疮性肾炎肾阴虚证cDNA消减文库的构建

• 作者: 李俊 李玉萍 罗仁 聂晓莉 赵晓山
• 来源期刊: 四川中医
• 学科: 医学
• 关键词: 狼疮性肾炎 肾阴虚证 抑制性消减杂交 基因组消减文库
• 年，卷（期）: 2006,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 22-24
• 页数: 3页
• 分类号: R593.24+2
• 字数: 4047字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-3649.2006.03.013

摘要

目的:采用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术构建汉族人狼疮性肾炎(Lupus Nephritis LN)肾阴虚证cDNA消减文库.方法:选择汉族人LN且中医辨证为肾阴虚证的患者以及正常人作为其对照组,进行正向和消减杂交.采用Trizol一步法提取总RNA,用SMART(Switch Mechanism At 5 end of RNA Template)技术逆转录并扩增总cDNA,用RsaI酶切基因组cDNA成大小不等的片段,分别与两种不同的接头连接,进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将PCR产物与U载体连接,经蓝白斑筛选后,再用PCR方法插入片段筛选出阳性重组质粒,构建LN肾阴虚证消减文库.结果:用SSH方法筛选出了LN肾阴虚证的差异cDNA片段,得到了450个白色克隆,再经PCR方法快速筛选出阳性重组质粒,从而成功地构建了LN肾阴虚证的cDNA消减文库.结论:SSH技术能够快速有效地分离差异cDNA片段以构建LN肾阴虚证cDNA消减文库,为进一步筛选和克隆LN肾阴虚证相关基因奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	罗仁	南方医科大学附属南方医院中医科	178	2253	25.0	39.0
2	李俊	南方医科大学附属南方医院中医科	24	319	9.0	17.0
3	李玉萍	南方医科大学附属南方医院中医科	27	238	10.0	14.0
4	聂晓莉	南方医科大学附属南方医院中医科	30	254	9.0	15.0
5	赵晓山		12	246	7.0	12.0