Pro370Leu突变型MYOC基因真核表达质粒的构建及其表达特点

• 作者: 孙慧敏 季建 李筱荣 王建文
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 青光眼,开角型 突变 基因表达 质粒 转染 Hela细胞
• 年，卷（期）: 2006,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 846-849
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9896.2006.12.006

摘要

目的:构建Pro370Leu突变型MYOC基因真核表达质粒,并在Hela细胞中表达以研究蛋白的定位和分泌特点.方法:以pGEM-T-MYOC质粒中MYOC为模板,用PCR介导的定点突变技术,得到Pro370Leu突变型MYOC基因(mMYOC),并定向亚克隆到真核表达质粒pDsRed2-N1上,得到pDsRed2-N1-mMYOC重组表达质粒,再用限制性内切酶消化和DNA测序鉴定,最后用脂质体包埋转染法转染Hela细胞,进行荧光显微镜观察,并用Western Blot分析蛋白分泌情况.结果:经酶切和DNA序列测定,证实重组质粒构建成功,mMYOC基因能在Hela细胞中表达,并且蛋白只定位在细胞质中,经Western Blot分析,mMYOC蛋白不能分泌到培养液中.结论:成功构建Pro370Leu突变型MYOC基因真核表达质粒pDsRed2-N1-mMYOC,并能有效表达,其表达的蛋白定位在细胞质,并且不能分泌.