与胃癌腹膜高转移细胞表面受体特异性结合的多肽片段的研究

• 作者: 吴开春 曹姗姗 李颖 樊代明 王钧 白飞虎 赵澎涛 雷婷
• 来源期刊: 中华医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 胃肿瘤 噬菌体 肽库 肿瘤细胞,培养的
• 年，卷（期）: 2006,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 659-663
• 页数: 5页
• 分类号: R73
• 字数: 4196字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0376-2491.2006.10.003

摘要

目的利用噬菌体随机肽库筛选与胃癌腹膜高转移细胞特异性结合的多肽,为肿瘤细胞的靶向性治疗筛选药物和载体.方法利用噬菌体随机十二肽库对人胃癌细胞系GC9811和其腹膜高转移亚系GC9811-P进行3轮差异筛选、富集,获得与胃癌腹膜高转移细胞亲和的噬菌体克隆.酶联免疫吸附实验(ELISA)测定其与GC9811-P和GC9811细胞的亲和力,提取阳性噬菌体DNA并进行DNA序列测定,获得与胃癌腹膜高转移细胞亲和的多肽序列并予合成.利用荧光染色和流式细胞仪鉴定噬菌体克隆和合成肽与胃癌腹膜高转移细胞的体内外的结合特异性.结果筛选及ELISA结果显示得到与GC9811-P细胞特异性结合并内化入癌细胞的噬菌体克隆,测序结果示45%的被检噬菌体展示相同的多肽序列SMSIASPYIALE,推测SMSI是胃癌腹膜高转移细胞特异性结合肽的基序.合成的多肽与细胞共孵育48 h或多肽药物浓度达5 μmol/L时,显示出明显的结合能力.平均荧光强度分别为17.19±0.42和16.89±0.31(每组实验为3个样本均值),与对照组无关肽PC的平均荧光强度(4.33±0.53)比较,差异有统计学意义(P＜0.01).合成的多肽与细胞共孵育72 h或多肽药物浓度达10 μmol/L时细胞的平均荧光强度为23.58±0.71和24.95±0.15(每组实验为3个样本均值),与对照组无关肽PC的平均荧光强度(4.16±0.24)比较,差异有统计学意义(P＜0.01).裸鼠体内试验说明合成的多肽可与GC9811-P细胞成瘤的组织结合而不与GC9811及其他细胞成瘤的组织结合.结论筛选噬菌体随机肽库获得能与胃癌腹膜高转移细胞特异性结合的多肽序列SMSIASPYIALE;合成的多肽与胃癌腹膜高转移细胞有特异亲和力,为进一步临床胃癌早期腹膜转移诊断和治疗提供高度特异性和敏感性的理想标志物和靶向载体.