摘要:
目的:观察中药蟾酥主要成分之一--脂蟾毒配基对体外培养人胃癌BGC-823细胞系细胞生长的干预及其与细胞色素C和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活化的关系.方法:实验于2004-09/2005-12在北京大学医学部细胞生物学系实验室完成.体外培养人胃癌BGC-823细胞系,脂蟾毒配基各组加入不同浓度的脂蟾毒配基(先用二甲基亚砜溶解,再经RPMI-1640培养液稀释至终浓度.细胞增殖及增殖抑制实验、细胞核形态观察及核DNA含量测定实验中脂蟾毒配基浓度分别为0.1,1,10 μmol/L;细胞周期分布实验、细胞凋亡率实验、线粒体膜电位实验中脂蟾毒配基浓度分别为0,1,2.5,5 μmol/L).空白对照组加入RPMI-1640培养液.盐酸阿克拉霉素组加入5 μmol/L盐酸阿克拉霉素.采用酸性磷酸酶法检测细胞增殖抑制作用;细胞荧光分光光度仪观察细胞核形态及核DNA含量测定;流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率及其线粒体膜电位变化;Western blot检测与细胞凋亡相关基因蛋白表达的变化.结果:①经0.1,1,10μmol/L脂蟾毒配基分别作用24,48,72 h后,细胞生长显著抑制,脂蟾毒配基对癌细胞的生长抑制百分率与剂量、时间呈正相关,其IC50分别为3.9,2.0,1.5μmol/L.②随脂蟾毒配基作用浓度和时间的延长,癌细胞核荧光强度减弱,细胞核DNA含量明显降低.③0.1,1μmol/L脂蟾毒配基作用24~48h后癌细胞阻滞在S期,5μmol/L脂蟾毒配基作用72 h时,细胞阻滞在G2+M期;盐酸阿克拉霉素与癌细胞作用24~48 h,细胞阻滞在S期,作用72 h时细胞阻滞在G2+M期.④脂蟾毒配基作用后,细胞凋亡率明显高于对照组.⑤脂蟾毒配基引起细胞线粒体膜电位下降,释放入胞质中的细胞色素C增多,促进半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白活化,抑制Bcl-2蛋白表达,诱导细胞凋亡.结论:体外实验条件下,脂蟾毒配基抑制人胃癌BGC-823细胞生长并诱导细胞发生凋亡,其诱导凋亡作用机制与线粒体通路有关.