重组β-干扰素上调HepG2细胞表达基因抑制性消减杂交技术筛选

• 作者: 张黎颖 成军 曲建慧 李晓东 郭江 钟彦伟
• 来源期刊: 医药导报
• 学科: 医学
• 关键词: 重组β-干扰素 抑制性消减杂交 反式调节
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 药物研究
• 页码范围: 96-98
• 页数: 3页
• 分类号: R979.5|R965
• 字数: 2400字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1004-0781.2006.02.003

摘要

目的利用抑制性消减杂交技术筛选重组β-干扰素(IFN-β)上调HepG2细胞表达基因.方法以重组IFN-β 2 000U·mL-1刺激对数生长期HepG2细胞,设经0.9%氯化钠注射液作用的HepG2细胞为阴性对照组;制备HepG2细胞裂解液,从中提取mRNA并逆转录合成cDNA,经RsaⅠ酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与阴性对照组cDNA进行两次消减杂交和两次抑制性聚合酶链反应(PCR),将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠埃希菌进行基因文库扩增,随机挑选克隆PCR后进行测序及同源性分析.结果成功构建了重组IFN-β作用HepG2后差异表达的cDNA消减文库.扩增后得到50个200～1 000bp插入片段的克隆,随机挑选其中31个插入片段测序,通过生物信息学分析获得其全长基因序列,共获得20种编码基因,其中1种为未知功能的新基因.结论通过该方法可筛选得到IFN-β作用于HepG2细胞后上调表达的部分基因,包括与细胞生长调节、物质代谢和细胞凋亡密切相关的一些蛋白编码基因.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	成军	北京地坛医院传染病研究所	210	843	13.0	20.0
2	张黎颖	北京地坛医院传染病研究所	34	100	5.0	8.0
3	钟彦伟		33	327	9.0	17.0
5	李晓东	解放军第302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室	20	101	5.0	9.0
6	郭江	北京地坛医院传染病研究所	32	103	7.0	8.0
7	曲建慧	解放军第302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室	15	63	4.0	7.0