构建人骨形态发生蛋白2及血管内皮生长因子165基因共表达重组腺病毒在兔骨髓基质干细胞中的表达

• 作者: 栗艳 漆家学 罗二平 闫露
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 骨形态发生蛋白质类 血管内皮细胞生长因子类 干细胞 骨髓细胞 腺病毒科
• 年，卷（期）: 2006,（33）
• 所属期刊栏目: 组织工程研究
• 页码范围: 56-59
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 5114字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2006.33.023

摘要

目的:构建人骨形态发生蛋白2及血管内皮生长因子基因共表达腺病毒并观察其在兔骨髓基质干细胞中的表达.方法:实验于2005-03/12在解放军第四军医大学唐都医院全军骨肿瘤研究所完成.①分别克隆人骨形态发生蛋白2及血管内皮生长因子基因,分别依次亚克隆至穿梭载体构建重组穿梭质粒pAdT-B2V并酶切鉴定;后经PmeⅠ酶切线性化后与骨架质粒感受态细胞AdEasier-1 Cells经电穿孔法同源重组得到腺病毒质粒pAdBMP-7并酶切鉴定.②PacⅠ酶切线性化后的pAdBMP-7腺病毒质粒转染293细胞包装后获得复制缺陷型重组腺病毒AdBMP-7,在荧光显微镜下计算表达绿色荧光蛋白细胞个数,测定AdB2V滴度.③将AdBMP-7体外感染兔骨髓基质干细胞后,以荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达及反转录-聚合酶链反应方法鉴定外源基因的表达,以β-肌动蛋白为内参照,未感染细胞为对照.④AdB2V感染兔骨髓基质干细胞后72 h以免疫细胞化学染色方法检测外源基因的表达,以未感染组为对照.结果:①酶切鉴定表明外源基因已插入到pAdTrack-CMV穿梭质粒且腺病毒重组质粒pAdBMP-7构建成功.②经293细胞包装3 d后可观察到绿色荧光蛋白表达,氯化铯梯度离心法最终获得约3×109 efu/L滴度的重组腺病毒.③体外感染兔骨髓基质干细胞后荧光显微镜观察及反转录-聚合酶链反应证实外源基因可在兔骨髓基质干细胞中表达,未感染组为阴性.④AdB2V感染兔骨髓基质干细胞后以免疫细胞化学染色均观察到外源基因的阳性表达,未感染组呈阴性表达.结论:成功构建人骨形态发生蛋白2及血管内皮生长因子165基因共表达重组腺病毒,证实了其在兔骨髓基质干细胞的表达,为骨再生的局部联和基因治疗打下基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	罗二平	解放军第四军医大学生物医学工程系卫装教研室	5	91	4.0	5.0
2	栗艳	解放军第四军医大学西京医院康复诊疗中心	2	9	2.0	2.0
3	闫露	解放军第四军医大学生物医学工程系卫装教研室	2	9	2.0	2.0
7	漆家学	解放军第四军医大学生物医学工程系卫装教研室	1	7	1.0	1.0