摘要:
目的:观察中药柴胡、丹参复方治疗非酒精性脂肪肝大鼠血脂、脂质过氧化系统、肝功能、过氧化物酶体增殖物激活受体γ蛋白和mRNA表达、肝组织病理变化及炎症反应的影响,分析影响非酒精性脂肪肝大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体γmRNA表达相关因素,了解柴胡、丹参复方治疗非酒精性脂肪肝的作用途径.方法:实验于2004-09/2005-03在大连医科大学附属第二医院中心实验室完成.①选用雄性SD大鼠30只,体质量(130±10)g.正常喂养1周后,按随机抽签法将大鼠分为3组:正常组、模型组、柴胡、丹参复方组,每组10只.正常组:普通饲料喂养;模型组和柴胡、丹参复方组:喂高脂饲料(普通饲料加质量分数0.1猪油、质量分数0.02胆固醇)造成非酒精性脂肪肝模型.②造模开始后第13周,正常组和模型组:灌胃生理盐水10 mL/kg,1次/d;柴胡、丹参复方组:灌胃柴胡、丹参复方溶液10mL/kg(由柴胡15 g,丹参15 g,泽泻15 g,半夏15 g,生山楂15 g组成,药材购自大连药材集团公司,水煎剂制成浓浸膏,加蒸馏水稀释成含生药0.17g/mL灌胃溶液),1次/d.③实验第16周末处死大鼠.用全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶活力和总胆固醇、三酰甘油水平.采用放免法测定血清肿瘤坏死因子α水平.按照试剂盒说明测定肝组织匀浆总胆固醇、三酰甘油、丙二醛含量和超氧化物歧化酶活力.④苏木精-伊红染色,光镜下评估脂肪变性程度(判断标准:以肝小叶内未见脂滴肝细胞为阴性,脂滴肝细胞占肝细胞总数<1/3为+,1/3~2/3为++,>2/3为+++,几乎均呈脂滴肝细胞为+++)和计算炎症活动度计分[计分标准为汇管区炎症(P)、小叶内炎症(L)、碎屑坏死(PN)及桥接坏死(BN)4项指标,每项依据病变程度分别计为1,2,3,4分,计分公式为:P+L+2(PN+BN)].⑤采用免疫组织化学染色检测肝组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ的表达.计算每张切片阳性细胞所占百分率进行分级:0为-,<10%为+,10%~50%为++,>50%为+++.⑥采用蛋白质免疫印迹法检测肝组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ蛋白表达.⑦采用反转录聚合酶链反应检测肝组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ mRNA表达.⑧两组间实验数据的比较采用成组设计的两样本均数t检验;等级资料采用秩和检验;两变量间相关性分析采用直线相关分析法.结果:大鼠30只均进入结果分析.①柴胡、丹参复方组肝脂肪变性程度明显轻于模型组(P<0.01).正常组基本无炎症细胞浸润;模型组肝小叶内出现汇管区炎症,炎症活动度计分明显高于正常组(P<0.01);柴胡、丹参复方组炎症活动明显轻于模型组(P<0.01).②模型组血清丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶活力和总胆固醇、肿瘤坏死因子α水平明显高于其他2组(P<0.01).③模型组大鼠肝匀浆总胆固醇、三酰甘油、丙二醛含量明显高于其他2组(P<0.01),超氧化物歧化酶活力明显低于其他2组(P<0.01).④正常组见棕黄色颗粒主要分布在汇管区周围肝细胞胞核内,中央静脉周围肝细胞阳性表达少;模型组过氧化物酶体增殖物激活受体γ阳性表达细胞明显少于其他2组(P<0.05~0.01).⑤模型组大鼠肝组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ的表达明显低于正常组和柴胡、丹参复方组(P<0.01).⑥模型组肝组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ mRNA表达与血清肿瘤坏死因子α和肝匀浆三酰甘油、丙二醛含量呈显著负相关(-0.917,-0.727,-0.763,P<0.05~0.01),与肝匀浆超氧化物歧化酶活力呈显著正相关(r=0.859,P<0.05).结论:①柴胡、丹参复方可使肝组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ的表达增强,能显著降低肝脏内三酰甘油储存、减轻脂质过氧化反应,使肝细胞脂肪变性及炎症程度显著减轻.②柴胡、丹参复方可通过增强核转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ的表达,抑制非酒精性脂肪肝大鼠肝组织脂质过氧化反应和炎症介质的释放,有效逆转高脂饮食造成的肝损伤.