镍对胚胎神经干细胞增殖和分化的调节

• 作者: 冯锦丽 施志敏 朱心红 李晓文 杨建明 陈亮 高天明
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 干细胞 神经系统/细胞学 钙通道,T型
• 年，卷（期）: 2006,（33）
• 所属期刊栏目: 干细胞研究
• 页码范围: 1-3,插图33-1
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 5224字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2006.33.001

摘要

目的:观察T型钙通道阻断剂镍对胚胎神经干细胞的调节,分析T型钙通道在神经干细胞增殖和分化中的作用.方法:实验于2004-08/2006-01在南方医科大学神经生物学教研室完成.选取清洁级成年雌性Wistar孕鼠1只,分离大脑半球,制成单细胞悬液,利用无血清培养技术,在添加碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、B27 supplement的DMEM/F12培养基中培养胚胎神经干细胞,当神经球增大至50～200个细胞/球时,即可传代.取第3代胚胎神经干细胞,在培养基中分别加入0,0.25,0.5,1.0mmol/L的氯化镍,以BrdU免疫荧光、四唑盐、流式细胞仪检测细胞增殖指数以及DCX和S-100β阳性细胞数.结果:①神经干细胞体外培养的鉴定:取原代和传代培养的细胞进行免疫荧光鉴定,发现均有细胞表达nestin抗原.传至第3代时,其阳性比例可达99%.②诱导分化及鉴定:分化2 d后,镜下观察细胞长出突起,已初步具有神经元和胶质细胞形态.免疫荧光染色显示分化细胞呈现DCX和S-100β阳性.③细胞增殖检测结果:加入0.25,0.5,1.0 mmol/L的氯化镍处理细胞,MTT检测其吸光度值分别为未加入氯化镍的62.09%,48.20%,34.85%,呈浓度依赖性降低(P均＜0.001);免疫荧光检测BrdU阳性细胞数分别为未加入氯化镍的85.75%,74.25%,57.01%(P＜0.05).流式细胞仪检测加入0.5 mmol/L氯化镍的单细胞悬液其增殖指数显著高于未加入氯化镍的单细胞悬液(66.11%,1.016%,P＜0.001).④镍对细胞分化的影响:单细胞悬液加入0.25,0.5,1.0 mmol/L氯化镍后,BrdU阳性细胞数量减少(P均＜0.001);DCX阳性细胞数分别比未加入氯化镍的单细胞悬液增加23%,52%,58%(P＜0.05或0.01);S-100β阳性细胞数增加85%,105%,110%(P＜0.05或0.01).结论:T型钙通道阻断剂镍可抑制胚胎神经干细胞的分裂增殖,促进其分化,提示T型钙通道可能参与胚胎神经干细胞增殖分化的调节.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	施志敏	南方医科大学神经生物学教研室	7	16	2.0	3.0
2	陈亮	南方医科大学神经生物学教研室	20	93	6.0	9.0
3	冯锦丽	南方医科大学神经生物学教研室	1	1	1.0	1.0
4	杨建明	南方医科大学神经生物学教研室	23	179	8.0	12.0
5	朱心红	南方医科大学神经生物学教研室	21	205	6.0	14.0
6	李晓文	南方医科大学神经生物学教研室	28	147	8.0	11.0