人ICOS胞外区腺病毒载体的构建与鉴定

• 作者: 冯嘉瑜 张艮甫 王平贤 范明齐 黄赤兵
• 来源期刊: 重庆医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 腺病毒 ICOS胞外区 同源重组
• 年，卷（期）: 2006,（16）
• 所属期刊栏目: 泌尿外科专题
• 页码范围: 1460-1462
• 页数: 3页
• 分类号: Q782
• 字数: 4204字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2006.16.009

摘要

目的 利用细菌内同源重组法构建含ICOS胞外区基因的重组腺病毒.方法 用基因工程的方法将ICOS胞外区的cDNA片段插入穿梭质粒pAdTrack-CMV中, 形成转移质粒pAdtrack-cmv-ICOS,将之PmeⅠ酶切线性化后与腺病毒基因组质粒pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183,同源重组质粒PacⅠ酶切鉴定后用脂质体转染293细胞,包装成重组体腺病毒颗粒Ad-ICOS.采用PCR方法对重组腺病毒颗粒进行鉴定,利用穿梭质粒pAdTrack-CMV中带有GFP报告基因,对病毒滴度和感染效率进行监测.通过Western Blot检测重组腺病毒感染后的293细胞上清中的ICOS胞外区蛋白.结果 获得了重组人ICOS胞外区腺病毒载体颗粒.PCR检测表明重组腺病毒颗粒含有目的基因,滴度为 2.1×1010pfu/ml.Western Blot检测到阳性目的条带.结论 细菌内同源重组法是一种高效、简便、快捷的重组体腺病毒载体制备方法.所制备的重组体腺病毒Ad-ICOS在体外能有效表达相应的基因产物,为今后对ICOS胞外区的深入研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄赤兵	第三军医大学新桥医院泌尿外科	164	676	12.0	18.0
2	王平贤	第三军医大学新桥医院泌尿外科	106	312	9.0	11.0
3	张艮甫	第三军医大学新桥医院泌尿外科	125	408	9.0	14.0
4	范明齐	第三军医大学新桥医院泌尿外科	105	316	9.0	11.0
5	冯嘉瑜	第三军医大学新桥医院泌尿外科	55	189	7.0	9.0