应用腺病毒载体介导RNA干扰技术构建糖皮质激素受体基因阻断的人U937巨噬细胞模型

• 作者: 刘玉秀 张方 施毅 李子玲 罗向东 赵明 辛晓峰 钱桂生
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 受体,糖皮质激素 腺病毒科 基因 转录,遗传
• 年，卷（期）: 2006,（29）
• 所属期刊栏目: 组织工程研究
• 页码范围: 89-91,插3
• 页数: 4页
• 分类号: R6
• 字数: 5722字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2006.29.041

摘要

目的:利用腺病毒载体介导的RNA干扰技术,建立糖皮质激素受体基因阻断的人U937巨噬细胞模型.方法:实验于2004-06/2005-05在解放军第三军医大学新桥医院呼吸研究所实验室完成.将针对糖皮质激素受体发挥RNA干扰效应的合成寡核苷酸序列连入含有绿色荧光蛋白基因的腺病毒穿梭质粒pRNAT-H1.1/Adeno中,在含有pAdEasy-1病毒骨架的BJ5183大肠杆菌内进行同源重组;重组子通过脂质体介导转染293T细胞,并在293T细胞内包装为具有感染能力的病毒颗粒,通过反复感染扩增病毒以达到感染靶细胞的适当滴度,通过绿色荧光表达来监控腺病毒扩增;应用Western blot法检测U937巨噬细胞感染后糖皮质激素受体蛋白的表达.结果:转染腺病毒载体的293T细胞表达绿色荧光,随着时间逐渐增强,并且出现明显的细胞病变效应,经过3轮扩增,病毒达到合适的滴度.受腺病毒感染的U937巨噬细胞内糖皮质激素受体蛋白表达明显降低.结论:可以成功构建针对糖皮质激素受体基因的RNA干扰腺病毒载体.