阿尔茨海默病患者β淀粉样肽40人单链抗体在大肠杆菌的表达和纯化

• 作者: 李方 王世真 蒲圻 蔡炯 郑连芳
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 阿尔茨海默病 淀粉样β蛋白 抗体 基因表达
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 114-116
• 页数: 3页
• 分类号: R749.1
• 字数: 4508字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2006.02.042

摘要

目的:重组表达并纯化抗β淀粉样肽40的人单链抗体,为被动免疫治疗阿尔茨海默疾病提供研究材料.方法:实验于2004-08/2005-03在核医学实验室完成.自制人单链抗体基因.将从人噬菌体单链抗体文库中筛选获得的抗β淀粉样肽40人单链抗体基因,克隆到pET22b(+)质粒,转化BL21-gold大肠杆菌,经0.5 mmol/L异丙基硫代-β-D半乳糖苷诱导表达抗β淀粉样肽40的人单链抗体.采用Ni2+-NTA-树脂柱亲和纯化尿素变性的包涵体内表达产物,经柱上复性,含咪唑缓冲液洗脱获得人单链抗体.应用western blot和酶联免疫吸附实验鉴定纯化的抗β淀粉样肽40的人单链抗体.用Branford法测定纯化抗体的浓度.结果:①抗β淀粉样肽40人单链抗体基因长度约为750 bp,重组表达产物相对分子质量33 000.②经过一次亲和柱纯化,从细菌包涵体中纯化出高纯度的抗β淀粉样肽40人单链抗体.③酶联免疫吸附实验分析表明纯化单链抗体和β淀粉样肽40结合的A595nm高于对照,差异显著(0.59±0.06,0.12±0.02,P＜0.05),表明从包涵体中纯化出来β淀粉样肽40人单链抗体保持了结合抗原的免疫活性.纯化β淀粉样肽40人单链抗体浓度为96 mg/L.结论:抗β淀粉样肽40的人单链抗体在大肠杆菌系统得以重组表达,利用亲和层析成功获得高纯度的重组单链抗体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蔡炯	中国协和医科大学中国医学科学院北京协和医院核医学科	2	4	1.0	2.0
2	李方	中国协和医科大学中国医学科学院北京协和医院核医学科	1	3	1.0	1.0
3	王世真	中国协和医科大学中国医学科学院北京协和医院核医学科	2	12	2.0	2.0
4	郑连芳	中国协和医科大学中国医学科学院北京协和医院核医学科	1	3	1.0	1.0
5	蒲圻	中国协和医科大学中国医学科学院北京协和医院核医学科	1	3	1.0	1.0