MAGE-3目的基因原核表达载体的构建和表达

• 作者: 杨红梅 杨萍 裴瑞 赵国强 陈晓玲 陈洁
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 逆转录-聚合酶链反应 黑色素瘤抗原-3 克隆表达 重组蛋白 肿瘤免疫
• 年，卷（期）: 2006,（21）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 3264-3267,3273
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 4386字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-8982.2006.21.019

摘要

目的 构建原核表达载体pGEX-4T-1-MAGE-3并检测其在大肠杆菌(E.coli)BL21中的表达,为制备以黑色素瘤抗原-3(MAGE-3)基因片段为基础的肽疫苗及特异诊断试剂提供抗原打下基础.方法 通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法制备MAGE-3目的基因,以pGEM-T Easy为克隆载体,pGEX-4T-1为原核表达载体,将MAGE-3目的基因克隆至pGEM-T Easy载体和亚克隆至pGEX-4T-1载体上.筛选、鉴定阳性克隆并将其转化E.coli BL21.经IPTG诱导,12%SDS-PAGE电泳分离和Western Blot表达鉴定.结果 正确构建了原核重组表达质粒pGEX-4T-1-MAGE-3;在E.co1i BL21中检测到含该重组表达质粒的转化菌表达出分子量35 kD的融合蛋白;基因测序结果表明,阳性克隆中的MAGE-3目的基因序列与GenBank公布的已知序列完全一致.结论 成功构建的原核重组表达载体pGEX-4T-1-MAGE-3及其所表达的融合蛋白,为以MAGE-3目的基因为基础的肽疫苗及特异诊断试剂的研制提供抗原打下了基础;为后续实验提供了依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵国强	郑州大学医学院微免教研室	245	807	11.0	16.0
2	陈洁		36	205	8.0	13.0
3	杨红梅		44	269	9.0	13.0
4	裴瑞		30	202	8.0	13.0
5	陈晓玲		31	163	7.0	12.0
6	杨萍		9	72	4.0	8.0