摘要:
目的:观察泻脏方法(六味地黄丸之三泻,即泽泻、茯苓、丹皮)治疗再生障碍性贫血效果,并分析其作用途径.方法:实验于2004-08/2005-01在成都医学院第一附属医院康复医学科完成.①选用昆明种雄性小鼠60只,鼠龄90 d,体质量(20.0±0.3)g.按随机抽签法将小鼠分为6组:空白对照组,造模组,阳性药物对照组,高、中、低剂量中药治疗组,每组10只.②小鼠驯养1周后,造模组及4个治疗组采用理化因素复合造模:一次全身2.5 Gy 60Co-y射线照射(剂量率1.105 3 Gy/min,距离240 cm,时间135 s),照射后4,5,6 d腹腔注射环磷酰胺40 mg/kg,氯霉素50 mg/kg.空白对照组小鼠假照射(铅砖屏蔽)照射后4,5,6 d腹腔注射等容量生理盐水.③造模完成后第1天开始用药,阳性药物对照组:灌胃4 mg/(kg·d)司坦唑醇(广西佳兆药业有限责任公司,批号020305,2.0 mg/片)混悬液;高、中、低剂量中药治疗组:灌胃0.5 mL/(20 g·d)相应高、中、低浓度泻脏方法治疗组方(组方:六味地黄丸之三泻泽泻、丹皮、茯苓各28 g;制备:两煎,每煎加水1 050 mL,各煎得525 mL,混匀,分为150,300,600mL 3组,水浴浓缩600和300mL各得150mL,分别为高、中浓度,未浓缩的150mL为低浓度.泻脏方法高、中、低浓度药物每毫升含生药0.32,0.16,0.08 g);空白对照组和造模组灌胃等容生理盐水.共干预时间13 d.④停药当日处死小鼠,取左侧股骨,甲醛溶液固定.采用Mias-2000图形分析系统,奥林巴斯BX50光学显微镜检测骨髓细胞核常规苏木精-伊红染色(反映骨髓细胞数),骨髓切片免疫组化染色Ki-67(反映骨髓细胞增生情况)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(反映骨髓细胞凋亡情况)、CD34(反映骨髓微循环情况)相关指标.⑤计量资料差异比较采用单因素方差分析,两组间比较采用LSD及SNK分析.结果:实验结束时,造模组,高、中、低剂量中药治疗组分别死亡4,4,3,1只,其他2组无死亡;空白对照组随机选取6只,进行所有指标的检测;造模组,阳性药物对照组,高、中、低剂量中药治疗组纳入苏木精-伊红染色检测结果统计6,10,6,7,9只;进行其余3项指标检测结果统计时在各组内随机选取6只.①阳性药物对照组、低剂量中药治疗组细胞核积分A值和细胞核面积明显高于造模组(P<0.01),细胞核平均A值、细胞核灰度明显低于造模组(P<0.01);高、中剂量中药治疗组细胞核积分A值明显高于造模组(P<0.05),细胞核灰度与造模组相近(P>0.05);高剂量中药治疗组细胞核面积明显高于造模组(P<0.01),细胞核平均A值明显低于造模组(P<0.01);中剂量中药治疗组细胞核面积明显高于造模组(P<0.05),细胞核平均A值与造模组相近(P>0.05).说明低剂量中药治疗组治疗效果最显著.②造模组骨髓切片免疫组化染色Ki-67相关指标积分A值、面积、平均A值明显低于空白对照组和低剂量中药治疗组(P<0.01).③造模组骨髓切片免疫组化染色半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3相关指标积分A值明显低于空白对照组和低剂量中药治疗组(P<0.01),面积和平均A值明显高于空白对照组和低剂量中药治疗组(P<0.01).④造模组骨髓切片免疫组化染色CD34相关指标周长、最大直径、最小直径明显低于空白组和低剂量中药治疗组(P<0.01),面积明显低于低剂量中药治疗组(P<0.01).结论:用三泻代表的泻脏方法(尤以低剂量显著)可促进髓内细胞增生,抑制髓内细胞凋亡,改善髓内微循环,从而促进理化因素所致再生障碍性贫血模型小鼠骨髓造血功能恢复.