酶消化法获得成年豚鼠膀胱卡哈尔间质细胞样细胞的体外原代培养及其特征鉴定

• 作者: 卢根生 宋波 李为兵 沈文浩 熊恩庆 金锡御
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 干细胞 间质细胞 膀胱 原癌基因蛋白质c-kit 细胞,培养的
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 干细胞研究
• 页码范围: 36-38
• 页数: 4页
• 分类号: R694
• 字数: 4491字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2006.01.015

摘要

目的:建立成年豚鼠膀胱卡哈尔间质细胞样细胞的原代培养方法,为进一步观察其电生理特性提供目标细胞.方法:实验于2005-04/08在第三军医大学第一附属医院中心实验室完成. ①细胞提取:取1～2个月龄成年豚鼠2只,雌雄不限.麻醉状态下处死,下腹部10g/L碘伏消毒后,即刻由腹部正中切口、于膀胱颈处取出膀胱,于解剖显微镜下仔细剔除膀胱外膜,纵行剖开膀胱、去除膀胱黏膜,将膀胱肌层置入含双抗的磷酸盐缓冲溶液中浸泡10 min.将上述处理的肌层组织剪成1 mm3小块,在含双抗的磷酸盐缓冲溶液中漂洗2次;换入10g/L胶原酶P溶液,盖紧瓶盖,置入37℃培养箱中消化30min,完全消化溶解后,移入离心管中离心. ②细胞培养:细胞沉淀中加入新鲜配制的达尔伯克(氏)改良培养基溶液(含体积分数为0.1的胎牛血清),吹打后按每瓶(容积25 mL)含(25～30)×104活细胞接种在培养瓶内,37℃,体积分数为0.05的CO2孵箱内静置培养;细胞接种第2天,可见胞体为梭形并有两个细胞突起的细胞贴壁,平滑肌细胞尚未贴壁.将未贴壁的平滑肌细胞转移至另一培养瓶,孵箱内静置3 d后,可见平滑肌细胞贴壁. ③培养细胞的观察与鉴定:采用相差显微镜观察和免疫细胞化学方法鉴定.结果: ①体外培养第2天可见胞体为梭形且胞体两极有两个细长突起的细胞贴壁,该类细胞酪氨酸蛋白激酶受体免疫细胞化学染色阳性,平滑肌肌动蛋白染色阴性,确认为豚鼠膀胱卡哈尔间质细胞样细胞. ②逼尿肌细胞3 d后贴壁,呈成纤维形生长,平滑肌肌动蛋白免疫细胞化学染色阳性,酪氨酸蛋白激酶受体染色阴性.结论:用酶消化法可获得成年豚鼠膀胱卡哈尔间质细胞样细胞,并在体外条件下生长,可用于卡哈尔间质细胞样细胞的电生理特性观察.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宋波	解放军第三军医大学西南医院全军泌尿外科中心	25	76	5.0	7.0
2	金锡御	解放军第三军医大学西南医院全军泌尿外科中心	6	23	3.0	4.0
3	熊恩庆	解放军第三军医大学西南医院全军泌尿外科中心	6	19	3.0	4.0
4	李为兵	解放军第三军医大学西南医院全军泌尿外科中心	3	4	1.0	2.0
5	卢根生	解放军第三军医大学西南医院全军泌尿外科中心	4	8	2.0	2.0
6	沈文浩	解放军第三军医大学西南医院全军泌尿外科中心	1	4	1.0	1.0