摘要:
背景:骨髓间质干细胞体内、外均能分化为心肌细胞,但数量少且定向分化率较低.目的:探讨干细胞因子促进骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的作用.设计:开放性实验.单位:咸宁学院心血管疾病研究所,华中科技大学同济医学院附属同济医院心内科.材料:实验于2003-10/2004-08在咸宁学院心血管疾病研究所实验中心完成.选取出生1~2 d的SD新生大鼠20只,用于心肌细胞的培养.另选取清洁级成年SD大鼠25只,随机数字表法分为干细胞因子组、空白对照组,12只/组,剩余1只大鼠用于骨髓间充质干细胞的提取、培养及纯化.方法:①在共培养前用4,6-联脒-2-苯基吲哚标记骨髓间充质干细胞.干细胞因子组对大鼠进行体内动员,连续5 d皮下注射重组鼠干细胞因子,20μg/(kg·d),然后提取其骨髓间充质干细胞于心肌细胞培养第3天进行共培养.空白对照组皮下注射相等剂量的生理盐水,未施加任何干预的骨髓间充质干细胞于心肌细胞培养第3天进行共培养.②用数码显微摄像及免疫荧光技术分别记录和检测MHC α/β、肌钙蛋白T的表达,测定4,6-联脒-2-苯基吲哚-骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的百分率.主要观察指标:①骨髓间充质干细胞生长情况.②检测4,6-联脒-2-苯基吲哚对骨髓间充质干细胞的核标记率.③拟做共培养的心肌细胞活力、纯度分析.④共培养后骨髓间充质干细胞向心肌细胞的分化情况.结果:①骨髓细胞悬液接种于塑料培养皿,细胞呈圆形散在分布于瓶底,24h换液后可见稀少的长梭形贴壁细胞,4 d后梭形贴壁细胞开始增多,进入对数增长期,8~12 d达到80%的融合.传代细胞增殖更加迅速,随着换液与传代,骨髓间充质干细胞逐渐得到纯化.②4,6-联脒-2-苯基吲哚对骨髓间充质干细胞的胞核标记率为100%.③心肌细胞体外培养第3天,搏动细胞的百分比为63%,搏动频率40~60次/min.免疫细胞化学技术检测肌钙蛋白T表达的阳性细胞百分比为75%.④在共培养的第2,3天,干细胞因子组4,6-联脒-2-苯基吲哚-骨髓间充质干细胞表达MHC α/β的阳性百分率均显著高于空白对照组(P<0.01);在共培养的第3,4,5天,干细胞因子组4,6-联脒-2-苯基吲哚-骨髓间充质干细胞表达肌钙蛋白T的阳性百分率亦均显著高于空白对照组(P<0.01).结论:干细胞因子对骨髓间充质干细胞具有明显的促增殖分化作用.