穿膜肽-凋亡蛋白融合蛋白导入人脐静脉内皮细胞和人肺腺癌Anip973细胞的生物学特性

• 作者: 刘兴汉 刘远莉 张宇雯 栗亚 陶站华 马洪星
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 肿瘤 细胞凋亡 抗肿瘤药 重组融合蛋白质类
• 年，卷（期）: 2006,（20）
• 所属期刊栏目: 癌症康复相关基础研究
• 页码范围: 104-106,封面
• 页数: 4页
• 分类号: R734.2
• 字数: 4615字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2006.20.048

摘要

目的:在大肠杆菌内表达穿膜肽与凋亡蛋白的融合蛋白,观察其诱导肺腺癌Anip973细胞凋亡的活性,并了解其是否有剂量依赖性.方法:实验于2005-08/2006-01在哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室完成.①在大肠杆菌中表达穿膜肽-凋亡蛋白并用IDA-Ni2+亲和层析纯化.②细胞增殖抑制实验:取对数生长期人脐静脉内皮细胞和Anip973细胞接种于96孔培养板中,培养12 h后加入终浓度分别为0,10,20,30,50,50mg/L融合蛋白培养48 h,弃上清,每孔中加入四甲基偶氮唑盐溶液(5g/L)20μL,继续孵育4 h,检测吸光度,计算肿瘤生长抑制率.③取对数生长期人脐静脉内皮细胞、Anip973细胞,每种细胞分成两组:给药组加入终浓度为30 mg/L穿膜肽-凋亡蛋白,对照组加入相同体积的磷酸盐缓冲液,继续培养48 h.苏木精-伊红染色,光镜下观察细胞形态;溴乙啶/丫啶橙荧光染色观察细胞凋亡率.结果:①细胞增殖抑制实验结果表明浓度为10～50 mg/L穿膜肽-凋亡蛋白对人脐静脉内皮细胞没有明显抑制作用,对Anip973细胞呈剂量依赖性抑制作用,半数抑制浓度为27 mg/L.②30 mg/L穿膜肽-凋亡蛋白作用48 h后,人脐静脉内皮细胞形态没有显著改变,对照组和给药组的凋亡率分别为(2.9±0.4)%和(3.1±0.6)%,没有显著差异(P＞0.05);Anip973细胞可见到细胞皱缩,染色质浓缩和出现凋亡小体等凋亡特征性形态变化,给药组和对照组凋亡率分别为(36.8±1.7)%和(6.7±0.5)%,差异显著(P＜0.01).结论:穿膜肽-凋亡蛋白能诱导肿瘤细胞凋亡,这种作用呈剂量依赖性,而对正常细胞没有毒性作用.