应用免疫磁珠负选法分离与纯化小鼠骨髓间充质干细胞

• 作者: 唐洪泰 夏照帆 程大胜 韦多 韩圣
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 骨髓细胞 间质干细胞 细胞培养技术
• 年，卷（期）: 2006,（41）
• 所属期刊栏目: 干细胞研究
• 页码范围: 28-30,插图41-2
• 页数: 4页
• 分类号: R394.2
• 字数: 5616字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2006.41.013

摘要

目的:拟建立体外分离纯化小鼠骨髓间充质干细胞的新方法,从而得到高纯度的骨髓间充质干细胞.方法:实验于2002-09/2005-03在解放军第二军医大学附属长海医院烧伤科实验室完成.①选取清洁级7 d龄FVB/N小鼠15只,利用免疫磁珠法(CD11b负选)从小鼠的骨髓细胞中分离纯化骨髓间充质干细胞:颈椎脱臼处死后无菌条件下取出小鼠双侧股骨,消毒离断后去除上清及脂肪层,吹打成单细胞悬液后接种于培养基中.贴壁细胞达到90%左右融合后,用胰蛋白酶和乙二胺四乙酸进行消化,将悬浮的细胞与CD11b抗体避光反应2 min,移入已预置入磁场的LD管,不加压通过,收集管中的细胞成分,用培养基重悬并吹打成单细胞悬液后以1×109 L-1～2×109 L-1的密度接种于培养基中培养.②培养传代后流式细胞仪检测细胞周期、表面标记物,并利用诱导剂观察其定向诱导为脂肪细胞和成骨细胞的能力.结果:①细胞形态学观察:免疫磁珠法获得的细胞几乎无圆形细胞夹杂,贴壁率高,形态单一呈典型成纤维样、漩涡状生长,体外增殖迅速.②细胞生长曲线绘制情况:细胞贴壁后一两天为细胞生长缓滞期,之后进入对数增长期,六七天后进入平台期.③细胞周期分析结果:G0/G1期细胞约86%,S+G2+M期约14%.④细胞表面标记物检测结果:第3代骨髓间充质干细胞3%表达CD45,68.7%表达CD29,3%表达CD34,89.6%表达CD105.⑤骨髓间充质干细胞向脂肪细胞与成骨细胞定向分化情况:在地塞米松、1-甲基-3-异丁基-黄嘌呤、吲哚美辛等诱导剂作用下,脂肪细胞+成骨细胞诱导组细胞第5天开始油红O染色显示细胞核呈蓝色,细胞内脂滴呈橙色;在β-甘油磷酸钠、2-磷酸-抗坏血酸等诱导剂的作用下,第10天开始AKP染色显示细胞内有致密颗粒形成,Von Kossa染色显示钙盐沉积.结论:本实验通过免疫磁珠法(CD11b负选)成功地从FVB/N小鼠骨髓细胞中分离纯化出骨髓间充质干细胞.根据表面标记物的检测结果提示该法获得的细胞纯度高、周期性慢、多分化潜能,符合干细胞特性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	夏照帆	解放军第二军医大学长海医院烧伤科	17	72	5.0	7.0
2	唐洪泰	解放军第二军医大学长海医院烧伤科	6	26	3.0	5.0
3	韩圣	解放军第二军医大学长海医院烧伤科	2	19	2.0	2.0
4	韦多	解放军第二军医大学长海医院烧伤科	1	11	1.0	1.0
5	程大胜	解放军第二军医大学长海医院烧伤科	5	19	2.0	4.0