人早老素1 5'端390碱基片段的真核表达载体的构建与鉴定

• 作者: 于顺 何欣 李尧华 温玉新 王鹏
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 阿尔茨海默病 聚合酶链反应 质粒
• 年，卷（期）: 2006,（10）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 86-88
• 页数: 3页
• 分类号: R749.053
• 字数: 3408字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2006.10.041

摘要

目的:构建表达人早老素1 N端部分肽段的基因重组质粒.方法:实验于2004-12/2005-01在北京老年医学研究所神经生物研究室完成.参照人早老素1 mRNA结构设计合成含适当酶切位点的聚合酶链反应引物,从质粒pBS-Presenilinsl扩增其5'端390bp的cDNA片段,插入质粒pGEX-4T-1,转化入大肠杆菌BL21(DE3),以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达,使其在大肠杆菌中表达以谷胱甘肽S转移酶为标签的融合蛋白质.用凝血酶定点分解融合蛋白,并应用亲和层析法纯化早老素1 N130肽.结果:聚合酶链反应扩增产物约400 bp,核酸序列分析结果显示,扩增产物为393 bp编码130个氨基酸.重组质粒在原核细胞中表达受异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导呈时间依赖性递增.纯化的目的蛋白在聚丙烯酰胺凝胶电泳上表现为单一条带,其表观相对分子质量为13 000.每升菌液可收获目的蛋白4.5 mg.结论:构建人早老素1 N端部分肽段的基因重组质粒,制备了基因重组型早老素1N130肽,并确认其亲水特征.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王鹏	北华大学医学院人体解剖教研室	133	693	12.0	19.0
3	李尧华	首都医科大学宣武医院北京老年病研究所神经生物研究室	24	136	7.0	11.0
4	于顺	首都医科大学宣武医院北京老年病研究所神经生物研究室	44	164	7.0	11.0
5	何欣	北华大学医学院人体解剖教研室	42	176	8.0	11.0
8	温玉新	北华大学医学院人体解剖教研室	9	14	3.0	3.0