摘要:
背景:海洛因能很快透过血脑屏障进入中枢神经系统,其脂溶性强,起效快,然而药物依赖的发生机制至今尚未完全明了,探索药物依赖的分子生物学机制,特别是基因表达改变的研究已成为该领域研究的热点.目的:探索与海洛因依赖性形成有关的特异性基因表达,以期阐明海洛因依赖的分子生物学机制.设计:以实验动物为观察对象的随机对照观察.单位:重庆医科大学附属第一医院心理卫生中心.材料:C57BL/6J小鼠8只,随机分为实验组和对照组,每组各4只.药品和试剂有海洛因、Tripure分离试剂、PolyATtract m RNA分离系统Ⅲ等.方法:实验组小鼠采用递增法皮下注射海洛因法建立海洛因依赖小鼠模型,连续注射7天,第7天9:00一次皮下注射80mg/kg,2 h后腹腔注射纳洛酮5 mg/kg.对照组小鼠皮下注射同体积的生理盐水及同剂量的纳洛酮.注射纳洛酮后立即将各组小鼠放入玻璃观察罩内,观察15 min内跳跃次数,15 min内出现眼睑下垂、腹泻、湿狗样拌动及前爪震颤的动物数,之后马上断头处死,采用Trripure分离试剂盒分别提取实验组和对照组脑组织的总RNA及其全部mRNA.然后进行抑制性消减杂交,杂交产物扩增,凝胶电泳分析.主要观察指标:实验组和对照组脑组织总的RNA、mRNA量;海洛因依赖小鼠脑内差异表达的cDNA片断.结果:各组小鼠测试结果全部进入结果分析.①注射纳洛酮后各组戒断症状观察结果:实验组小鼠腹腔注射纳洛酮后皆出现戒断症状,15 min内跳跃次数为(9.75±1.65)次,与对照组比较差异有显著性(P<0.01).②两组小鼠脑组织总RNA、mRNA量的比较及海洛因依赖小鼠脑内差异表达的cDNA片断:实验组小鼠脑内总RNA和mRNA量均较对照组高,mRNA的差异具有显著性(P<0.05),经二轮轮抑性消减杂交后,获得杂交混合物,经PCR和巢式PCR扩增,获得了差异表达的cDNA片断.结论:海洛因依赖戒断可引起基因表达的改变,海洛因依赖小鼠脑内可能存在特异性基因表达.