Midkine启动子调控的HSV-TK基因重组腺病毒的构建

• 作者: 杨俊涛 王荣 陆建华 陆春明 顾红光
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: 胸苷激酶 基因 基因载体 重组 腺病毒
• 年，卷（期）: 2006,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 4-6
• 页数: 3页
• 分类号: R394.8
• 字数: 3510字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2006.05.002

摘要

目的构建以人midkine(MK)启动子调控的TK基因的重组复制缺陷型腺病毒.方法以AdenoXTM表达试剂盒为基础,应用分子克隆技术,将穿梭质粒pShuttle的CMV启动子替换为MK启动子,并将由pHSV-106获取HSV-TK基因的编码序列亚克隆至其下游,酶切鉴定阳性重组穿梭质粒pShuttle-MK-TK.通过I-CeuI和PI-SceI两个稀有酶切位点,将目的基因与腺病毒质粒DNA(pAdeno-X)进行体外连接,获得含目的基因的重组腺病毒质粒DNA,后者经限制性内切酶Pac Ⅰ切割后,两端露出反向末端重复序列(ITR),利用脂质体转染293细胞,获得含有目的基因重组腺病毒上清,PCR检测.结果酶切结果显示,MK启动子与TK基因均正向插入pShuttle中,TK位于MK启动子的下游.PCR检测显示重组腺病毒中含有MK启动子及TK基因片段.结论体外连接法可成功构建以人MK启动子调控的TK基因的重组腺病毒.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	顾红光		2	3	1.0	1.0
2	陆春明		1	0	0.0	0.0
3	王荣		1	0	0.0	0.0
4	陆建华		1	0	0.0	0.0
5	杨俊涛		1	0	0.0	0.0