髓内脂肪细胞对骨髓基质细胞成骨能力及凋亡的影响

• 作者: 王华松 罗永湘 陈庄洪
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 细胞培养技术/方法 脂细胞 骨髓细胞 骨生成 细胞凋亡 原位缺口末端标记 流式细胞术
• 年，卷（期）: 2006,（29）
• 所属期刊栏目: 组织工程研究
• 页码范围: 94-97,插4
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 5927字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2006.29.043

摘要

目的:观察骨髓内脂肪细胞对骨髓基质细胞成骨能力的影响,以及能否产生诱导骨髓基质细胞凋亡的作用.方法:实验于2001-07/2003-06在华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科实验室完成.将骨髓基质细胞以109 L-1的浓度接种于培养板和培养瓶中,加入含体积分数为0.1的胎牛血清,100 U/mL青霉素,100 mg/L链霉素的DMEM培养基.上述细胞随机分为空白对照组、106,107,108,109 L-1脂肪细胞组,分别加入0,106,107,108,109 L-1不同浓度的脂肪细胞,37℃、体积分数为0.05的CO2饱和湿度培养箱中培养,建立脂肪细胞和骨髓基质细胞共培养体系.培养时间为12 d,每4 d取各组细胞样本检测细胞内碱性磷酸酶活性,利用原位杂交方法检测Ⅰ型胶原mRNA表达,3H-脯氨酸掺入实验检测骨髓基质细胞胶原合成能力,并以TUNEL法及流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:①共培养体系建立后细胞形态学观察:细胞共培养体系建立48 h后,细胞开始贴壁.72 h后贴壁的骨髓基质细胞主要为短梭形,部分为多边形,并伸出突起,体积增大,具有典型的成纤维细胞特点.贴壁的脂肪细胞呈多角形或圆形,细胞透明度较好.②脂肪细胞对骨髓基质细胞碱性磷酸酶活性的影响:与空白对照组比较,培养第4,8,12天随着共培养体系中脂肪细胞的浓度不断上升,骨髓基质细胞内碱性磷酸酶活性均有不同程度的下降(P＜0.05或P＜0.01).③脂肪细胞对骨髓基质细胞内Ⅰ型胶原mRNA表达的影响:空白对照组染色最深,即表达最强,随着培养体系中脂肪细胞浓度增加,染色由深逐渐变浅,即Ⅰ型胶原mRNA表达逐渐减弱.④3H-脯氨酸掺入实验结果:空白对照组第4天每分钟脉冲数值最高,随时间延长有所下降.随脂肪细胞浓度的上升,各组每分钟脉冲数值均有不同程度降低,并具有浓度及时间依赖的特征.⑤细胞凋亡TUNEL检测结果:在含有脂肪细胞的共培养体系中,被标记呈棕色的凋亡细胞,细胞核染色质浓聚成致密的斑点状,核固缩甚至碎裂.同一时间点106,107,108,109 L-1脂肪细胞组凋亡细胞明显多于空白对照组(P＜0.01),空白对照组中几乎没有凋亡细胞.⑥细胞凋亡流式细胞仪检测结果:各组悬浮细胞经流式细胞仪检测后,空白对照组细胞均集中于左下象限,共培养体系中均可在右下象限发现有凋亡细胞存在.结论:髓内脂肪细胞干扰了骨髓基质细胞的成骨能力,并能够诱导骨髓基质细胞的凋亡,可能与原发性骨质疏松症的发病有关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	罗永湘	华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科	54	408	11.0	18.0
2	陈庄洪	解放军广州军区武汉总医院骨科	8	41	4.0	6.0
3	王华松	解放军广州军区武汉总医院骨科	2	15	2.0	2.0