应用原瓶黏附分选表皮干细胞的方法学特点

• 作者: 张可飞 彭展 李彦峰 王智崇 葛坚 陈系古 高楠 黄冰
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 表皮 干细胞 细胞分离
• 年，卷（期）: 2006,（45）
• 所属期刊栏目: 干细胞研究
• 页码范围: 39-42,插3
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 7279字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2006.45.016

摘要

目的:探索一种简单易行的方法分离表皮干细胞,为组织工程学的进一步研究奠定基础.方法:实验于2005-07/12在中山大学眼科中心国家眼科学重点实验室完成.健康3个月龄恒河猴2只,分离与培养猴表皮细胞,获取第2～4代的细胞,消化后,将细胞重新放回原瓶中,培养箱中静置20 min,获得的贴壁细胞即为快吸附的表皮细胞.①于光学显微镜下观察分选前细胞和快吸附细胞.②对20 min快吸附的表皮细胞进行整合素α6和CD71流式细胞仪检测,以未经吸附分选的细胞作为对照.③20 min快吸附的表皮细胞和分选后未黏附细胞分别制作3组细胞爬片,进行整合素β1、K15、和K10的免疫组织化学染色.④20 min快吸附的表皮细胞和分选后未黏附细胞进行K15、整合素β1和K1(K10对应角蛋白)的mRNA反转录聚合酶链反应的检测.结果:①分选后的细胞体积较小,核浆比例较大.②流式细胞仪的结果显示快吸附细胞以干细胞为主(α6bri CD71dim 为82.5±1.641),也含有少量的短暂扩增细胞(α6bri CD71bri 为4.9±2.125),有丝分裂后细胞及终末细胞则检测不到(α6dim).③免疫组化可见快吸附细胞呈K15和整合素β1阳性,K10阴性;分选后未黏附细胞K10为阳性,而K15和整合素β1均为阴性.④反转录聚合酶链反应示吸附分选后的快吸附细胞高表达K15和β1整合素,K10没有表达;而分选后剩余的细胞只表达K10.结论:原瓶黏附分选方法是一种简单可行的分选表皮干细胞的方法.