摘要:
背景:糖尿病肾病是糖尿病最严重的血管并发症之一.中药制剂黄芪、大黄组成复方在临床用于防治糖尿病肾病多年,具有确切的保护糖尿病患者肾脏的作用,但其作用机制需观察探讨.目的:观察以黄芪、大黄复方组成的中药制剂肾康丸对高糖培养大鼠系膜细胞增殖及细胞外基质分泌的影响.设计:随机对照观察.单位:南方医科大学珠江医院中西医结合肾病中心和南方医科大学南方医院药局. 材料:血清药理学实验于2005-04在南方医科大学实验动物研究中心完成.细胞培养实验于2005-04/07在南方医科大学细胞培养室完成.选择健康雄性Wistar大鼠16只,体质量190~220 g.方法:16只大鼠随机分为4组,正常血清组、开搏通组、肾康丸大小剂量组(肾康丸主要由黄芪、大黄、水蛭、芡实、玉米须等组成,由南方医科大学珠江医院药剂科生产,制剂号20031214).①开搏通及肾康丸高低组分别按5 mg/kg,2.4 g/kg和1.2g/kg体质量灌服相应药物混悬液.正常血清组灌服等容积生理盐水.连续灌胃7 d,麻醉,分离药物血清.②体外培养大鼠系膜细胞,用不同浓度葡萄糖(10,20,30和40 mmol/L)分别刺激24,48,72和96 h后,四甲基偶氮唑盐法测增殖.③培养的系膜细胞随机分为6组,低糖组(10 mmol/L),高糖组(30 mmol/L),正常血清组(30 mmol/L葡萄糖),开搏通(50g/L开搏通药物血清)组(30 mmol/L葡萄糖)及肾康丸高低高糖(30 mmol/L葡萄糖).培养72 h后,采用四甲基偶氮唑盐法测定各组细胞增殖,酶联免疫法测系膜细胞分泌纤连蛋白水平,反转录-聚合酶链反应法测系膜细胞重纤连蛋白mRNA的表达.主要观察指标:①不同浓度葡萄糖对大鼠系膜细胞增殖的影响.②各组系膜细胞增殖及分泌纤连蛋白和纤连蛋白mRNA表达情况.结果:①不同浓度的葡萄糖对系膜细胞增殖的影响:与低糖组(10mmol/L)比较,20mmol/L葡萄糖在实验的96 h里能促进系膜细胞增殖,但仅在72 h和96 h具有统计学意义(P<0.05).30 mmol/L葡萄糖在实验的24 h至96 h里均能显著促进系膜细胞增殖(P<0.05或P<0.01),72 h内随着作用时间的延长,促进增殖作用越明显,72 h后作用减弱,但仍有统计学意义;40 mmol/L浓度的葡萄糖在48 h内对系膜细胞增殖有促进作用(P<0.05),48 h后作用减弱,甚至转为抑制.②药物血清对系膜细胞增殖的影响:高糖组吸光度值明显高于低糖组(P<0.01).与高糖组比较,开搏通、肾康丸高低剂量组吸光度值均明显降低(P<0.01或P<0.05).正常血清组与高糖组比较差异无显著性(P>0.05).③药物血清对系膜细胞分泌纤连蛋白的影响:高糖组细胞上清中纤连蛋白含量显著高于低糖组(P<0.01).与高糖组比较,开搏通及肾康丸高低剂量组纤连蛋白含量均显著降低(P<0.01或P<0.05),而正常血清组纤连蛋白含量变化无显著性差异(P>0.05).④药物血清对系膜细胞中纤连蛋白mRNA表达的影响:高糖组纤连蛋白条带明显比低糖组明亮,且其与β-actin条带吸光度比值明显升高(P<0.01).与高糖组比较,开搏通及肾康丸高低剂量组纤连蛋白条带亮度显著降低,与β-actin条带吸光度比值也显著减少(P<0.01),而正常血清组上述变化无显著性差异(P>0.05).结论:高糖可以促进系膜细胞增殖,增加系膜细胞分泌纤连蛋白,提高系膜细胞中纤连蛋白mRNA的表达.肾康丸能明显抑制上述作用.肾康丸可以抑制高糖诱导的系膜细胞增殖及细胞外基质分泌.