局灶性脑缺血大鼠永生化神经前体细胞移植的可行性

• 作者: 刘志恒 姚文龙 张传汉 桂伶俐 祝畅 钱巍
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 抗原,多瘤病毒转化 干细胞 脑缺血 移植 大鼠
• 年，卷（期）: 2006,（45）
• 所属期刊栏目: 干细胞研究
• 页码范围: 36-38,插2
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 5109字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2006.45.012

摘要

目的:观察局灶性脑缺血大鼠移植永生化神经前体细胞在脑内的存活情况,为进一步研究细胞移植及转基因治疗脑缺血提供有意义的数据及图像资料.方法:实验于2005-10/2006-03在华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学实验室进行.①选取健康雄性SD大鼠18只,随机数字表法分为假手术组、脑缺血对照组、细胞移植组,6只/组.②脑缺血对照组、细胞移植组采用线栓法建立大鼠右侧大脑中动脉缺血模型.假手术组仅分离血管,不进行脑缺血处理.③应用无血清Neurobasal培养基进行INPC培养,移植前加入BrdU,使终浓度为10μmol/L,标记3 d,然后取出细胞爬片,无水甲醇固定10 min,SP法检测BrdU标记细胞阳性率.④将BrdU标记3 d的永生化神经前体细胞用胰蛋白酶消化,离心重悬后使细胞密度达到2×1010 L-1,细胞移植组于大鼠脑缺血后3 d取5μL永生化神经前体细胞移植到右侧纹状体缺血半暗带区,以前囟为零点,即A:-0.5 mm,R:2.5 mm,V:-4.5 mm.脑缺血对照组仅注射等量磷酸盐缓冲液.⑤各组分别于缺血后6 h,1 d,3 d及细胞移植后1周对大鼠进行Longa神经功能评价(0～4分,分数越高表示神经功能损伤越严重),缺血后6 h神经功能评分≥1分视为模型成功.⑥细胞移植后1周处死各组大鼠,取脑组织制作冰冻切片,通过免疫组织化学SP法检测BrdU的表达,观察移植的永生化神经前体细胞在脑内缺血半暗带区的存活情况.结果:18只大鼠均进入结果分析.①体外检测移植细胞BrdU标记阳性率:永生化神经前体细胞加入BrdU标记3 d后,免疫组化检测阳性细胞胞核呈棕黄色,细胞阳性率达95%以上.②造模后不同时间点各组大鼠神经功能评价:缺血后6 h,脑缺血对照组与细胞移植组每只大鼠神经功能Longa评分均≥1分,表明造模成功,且Longa评分均明显高于假手术组[(1.70±0.48)分,(1.60±0.52)分,0分,P＜0.05].缺血后6 h,1 d,3 d及细胞移植后l周脑缺血对照组与细胞移植组Longa评分均基本相似(P＞0.05).③移植细胞的存活情况:细胞移植后1周,细胞移植组在永生化神经前体细胞移植侧针道附近可检测到BrdU免疫染色阳性细胞,而假手术组、脑缺血对照组、细胞移植组的移植对侧BrdU免疫染色均呈阴性.结论:永生化神经前体细胞植入局灶性脑缺血大鼠缺血半暗带区后,主要存活于移植侧针道附近.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘志恒	深圳市第二人民医院麻醉科	49	150	7.0	10.0
2	钱巍	华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室	18	60	5.0	7.0
3	张传汉	华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室	113	532	13.0	17.0
4	姚文龙	华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室	33	52	4.0	5.0
5	桂伶俐	华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室	28	56	4.0	6.0
6	祝畅	华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室	14	14	2.0	2.0