摘要:
背景:补阳还五汤是一种临床上常用的治疗缺血性脑血管疾病的中药,其作用机制还有许多不明之处.目的:观察补阳还五汤及拆方对脑缺血再灌注SD大鼠模型细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响及其作用机制,并研究方剂配伍的意义.设计:随机对照的动物实验.单位:河南中医学院第一附属医院神经内科.材料:实验在河南省中医药研究院国家中医管理局三级实验室进行.选择上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供的清洁级SD大鼠60只,月龄4~5个月;雌雄各半,雌性260~310 g,雄性280~330 g.活血组药物选用当归120 g,桃仁60 g,川芎60 g,加水1440 mL,提取挥发油,备用.药渣及提取液加入赤芍120 g,地龙60 g,红花60 g,再加入1 440 mL水,煎煮1 h,滤过,药渣再加入2 880 mL水,煎煮1 h,滤过,合并两次煎液,浓缩至1 200 mL,加入挥发油及吐温-80 3 mL,混匀,即得.黄芪组药物选用黄芪1 200 g,加水7 200 mL,煎煮两次,每次1 h,滤过,合并煎液,浓缩至600 mL,加入吐温-80 2 mL,即得.补阳还五汤组选用当归60 g,桃仁30 g,川芎30 g,加水720 mL,提取挥发油,备用.药渣及提取液加入黄芪1 200 g,赤芍60 g,地龙30 g,红花30 g,再加入920 mL水,煎煮1 h,滤过,药渣再加入8 640 mL水,煎煮1 h,滤过,合并两次煎液,浓缩至600 mL,加入挥发油及吐温-80 3 mL,混匀,即得.(黄芪组和补血组药物为补阳还五汤的拆方.)活血组药物每毫升相当生药0.4 g,黄芪组药物每毫升相当于生药2 g,全方组药物相当于生药2.4 g.方法:将60只清洁级SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、活血组、黄芪组、总方组,每组分别为12只.每只SD大鼠分别通过灌胃给药:活血组8g/kg、黄芪组40g/kg、总方组48g/kg,假手术组及模型组分别给予生理盐水20 mL/kg.通过四血管结扎法制作脑缺血再灌注模型.采用缺口末端标记法原位检测凋亡细胞(TUNEL),应用免疫组化法测定Bcl-2蛋白、Bax蛋白的表达.主要观察指标:①各组SD大鼠脑组织神经元细胞凋亡水平的比较;②各组SD大鼠脑组织神经元Bcl-2、Bax阳性细胞表达水平的比较.结果:①各组SD大鼠脑组织神经元细胞凋亡水平比较:与假手术组相比,其他各组细胞凋亡明显增加(t=6.07~11.70,P<0.01);与模型组相比,活血组、黄芪组细胞凋亡减少(t=2.71,2.06,P<0.05),总方组减少明显(t=5.34,P<0.01).②各组SD大鼠脑组织神经元Bcl-2、Bax阳性细胞表达水平的比较:与假手术组相比,活血组、黄芪组、总方组Bcl-2染色阳性细胞的表达增多(t=4.59~8.82,P<0.01),Bax阳性细胞表达更加明显(t=4.59~8.55,P<0.01);与模型组相比,活血组、黄芪组、总方组Bcl-2染色阳性细胞的表达增多(t=3.48~7.75,P<0.01),Bax阳性细胞的表达降低(t=3.83~5.88,P<0.01).活血组药物作用与黄芪组差异无显著性(P>0.05),总方组药物作用与黄芪组、活血组差异极具显著性(P<0.01).结论:补阳还五汤及拆方通过抑制细胞凋亡的作用,达到抗脑缺血再灌注损伤的作用.黄芪组和活血组即拆方的协同作用,使总方组发挥最大的疗效.