摘要:
目的:观察乌龙丹对大鼠局灶性脑缺血神经元损害病理过程的保护作用,并分析其作用途径.方法:实验于2004-09/2005-10在南方医科大学中医药学院实验室完成.①选用Wistar大鼠30只,3~4月龄,体质量(250±20)g.按随机抽签法将大鼠分为5组(每组6只):假手术组:只做开颅术,不结扎血管;模型组和乌龙丹低、中、高剂量组:造成局灶性脑缺血模型.乌龙丹低、中、高剂量组:造模前灌胃乌龙丹流浸膏[乌龙丹由生黄芪、葛根、制首乌、川芎、丹参、地龙、全蝎、制僵蚕、水蛭、生晒参、石菖蒲、女贞子、白术、当归组成,由南方医科大学南方医院中药房提供,加工为流浸膏(含生药2.5g/mL)]1,2,4 mL,给药7 d;假手术组:术前灌胃2 mL生理盐水,干预7 d;模型组:造模前灌胃2 mL生理盐水,干预7 d.②于末次给药后2 h造模:结扎右侧颈总动脉,夹闭左侧颈总动脉1 h后放开;阻断大脑中动脉造成局灶性脑缺血模型.③大鼠造模24 h后,剥取脑组织,冠状连续切片.在JEM1200-EX透射电镜下观察脑组织的超微结构.采用原位末端标记法,按试剂盒说明书方法操作,应用图形分析仪系统,计算原位末端标记法染色阳性细胞数(细胞凋亡数).采用免疫组化法,按试剂盒说明书方法操作检测Bcl-2与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白表达情况.④组间计量资料差异比较采用单因素方差分析,结果:Wistar大鼠30只均进入结果分析.①假手术组:神经细胞形态正常.模型组:神经细胞有明显病理改变,神经元肿胀或浓缩,有凋亡细胞表现.乌龙丹3个剂量组:多数细神经细胞胞保存完好,神经细胞基本形态结构完整,与假手术组相似.②模型组脑组织原位末端标记法染色阳性细胞、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3免疫反应阳性细胞数明显多于其他4组(P<0.05),Bcl-2免疫反应阳性细胞数明显少于其他4组(P<0.05).乌龙丹低、中、高剂量组神经细胞凋亡情况与相关基因表达与假手术组相近.结论:乌龙丹具有减轻局灶性脑缺血神经细胞结构的病理损伤,对抗细胞凋亡的神经保护作用,该作用发挥可能与乌龙丹影响脑缺血后Bcl-2,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3基因表达有关.