人骨形态发生蛋白2与血管内皮生长因子165双基因真核表达质粒的构建及体外表达

• 作者: 孙立 张宇坤 杨述华 田晓滨 郜勇
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 骨形态发生蛋白质类 受体,血管内皮生长因子 基因表达
• 年，卷（期）: 2006,（9）
• 所属期刊栏目: 组织工程研究
• 页码范围: 84-86
• 页数: 4页
• 分类号: R681.3
• 字数: 4567字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2006.09.035

摘要

目的:构建人骨形态发生蛋白2与血管内皮生长因子165双基因真核表达质粒.方法:实验于2005-03/2005-10在华中科技大学同济医学院公共实验平台完成.①通过聚合酶链反应对pcDNA3.1-BMP2及pUC-CAGGS-VEGF165的目的基因片段亚克隆并引入新的酶切位点,将其分别定向连入真核双表达载体pIRES,构建同时表达两个目的基因的双顺反子,通过聚合酶链反应、酶切分析及DNA序列测定鉴定重组质粒.②重组质粒经脂质体介导体外转染小鼠骨髓基质细胞,通过反转录-聚合酶链反应检测骨形态发生蛋白2及血管内皮生长因子165 mRNA的表达.结果:①pIRES-BMP2-VEGF165双基因表达质粒的构建和鉴定:将重组质粒pIRES-BMP2-VEGF165分别作Xho I/Mlu I和Xba I/Not I双酶切,经10 g/L琼脂糖凝胶电泳可见1.2 kbp的人骨形成蛋白2条带和592 bp的血管内皮生长因子165条带,酶切条带与聚合酶链反应产物电泳带处于相同位置.经聚合酶链反应、酶切分析及DNA序列测定证实,目的基因插入片段方向正确,DNA序列无突变.②骨形成蛋白2、血管内皮生长因子165 mRNA的表达:以转染pIRES空质粒为阴性对照,48 h后提取转染细胞的RNA分别用P1,P2和P3,P4作为引物进行反转录-聚合酶链反应.结果表明转染pIRES-BMP2-VEGF165的小鼠骨髓基质细胞扩增出1.2 kbp及592 bp两条带.证实该重组质粒能在体外同时表达骨形态发生蛋白2及血管内皮生长因子165 mRNA.结论:成功构建了可同时表达骨形态发生蛋白2及血管内皮生长因子165的双基因真核表达质粒,为进行联合基因治疗骨缺损的实验研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	田晓滨	贵州省人民医院骨科	164	835	14.0	21.0
2	杨述华	华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科	562	4404	28.0	40.0
3	孙立	华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科	11	33	4.0	5.0
4	张宇坤	华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科	25	117	7.0	9.0
5	郜勇	华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科	15	97	4.0	9.0