狼疮性肾炎肾阳虚证cDNA消减文库的构建

• 作者: 李俊 李玉萍 罗仁 聂晓莉 赵晓山
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 狼疮肾炎 肾阳虚 杂交 基因组文库
• 年，卷（期）: 2006,（47）
• 所属期刊栏目: 中医康复研究
• 页码范围: 4-7
• 页数: 4页
• 分类号: R2
• 字数: 6260字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2006.47.002

摘要

目的:采用抑制性消减杂交技术构建汉族人狼疮性肾炎肾阳虚证cDNA消减文库. 方法:选择2005-08/10南方医科大学南方医院中医科收治的狼疮性肾炎肾阳虚证患者5例,另选择与上述年龄相匹配的健康正常人5名作为正常对照组.狼疮性肾炎肾阳虚证患者组和正常对照组进行正向和反向消减杂交.采用Trizol一步法提取总RNA,用SMART(SwitchMechanism At 5 end of RNA Template)技术逆转录并扩增总cDNA,用RsaⅠ酶切基因组cDNA成大小不等的片断,分别与两种不同的接头连接,进行两次消减杂交及两次抑制性聚合酶链反应,将聚合酶链反应产物与U载体连接,经蓝白斑筛选后,再用聚合酶链反应方法插入片段筛选出阳性重组质粒,构建狼疮性肾炎肾阳虚证消减文库.结果:TRIzol一步法抽提的总RNA纯度高(A250nm/A280nm＞1.90),用SMART技术扩增微量RNA,扩增产物双链cDNA主要分布在0.5～10kb,基因组cDNA经RsaⅠ内切酶酶切后片段主要集中在200～2 000 bp.用抑制性消减杂交方法筛选出了狼疮性肾炎肾阳虚证的差异cDNA片段,得到了480个白色克隆,再经聚合酶链反应方法快速筛选出阳性重组质粒,从而成功地构建了狼疮性肾炎肾阳虚证的cDNA消减文库.结论:抑制性消减杂交技术能够快速有效地分离差异cDNA片段以构建狼疮性肾炎肾阳虚证cDNA消减文库,为进一步筛选和克隆狼疮性肾炎肾阳虚证相关基因奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	罗仁	南方医科大学中医药学院	178	2253	25.0	39.0
2	李俊	南方医科大学中医药学院	24	319	9.0	17.0
3	李玉萍	南方医科大学中医药学院	27	238	10.0	14.0
4	聂晓莉	南方医科大学中医药学院	30	254	9.0	15.0
5	赵晓山	广州中医药大学消化内科	12	246	7.0	12.0