内皮抑制素相互作用蛋白HT036基因的全长克隆及其促血管上皮细胞凋亡的分子机制

• 作者: 刘又宁 孙敬芬 张宝林 曹璐 范保星 陈良安
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 基因 抑制素类 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2006,（41）
• 所属期刊栏目: 组织工程研究
• 页码范围: 66-68
• 页数: 3页
• 分类号: R349.83
• 字数: 4215字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2006.41.032

摘要

目的:克隆与内皮抑制素(endostatin)相互作用蛋白HT036基因的全长,进一步验证其与内皮抑制素的相互作用,初步阐明其促血管上皮细胞凋亡的分子机制.方法:实验于2004-10/2006-03在解放军总医院呼吸科实验室、军事医学科学院放射医学和生物工程研究所实验室完成.①根据已知HT036的EST序列设计引物,应用RACE技术,从人胎肝cDNA文库获取该基因全长.②采用免疫共沉淀和Western Blot验证HT036蛋白与内皮抑制素在真核细胞内存在相互作用.③利用真核瞬时表达载体pCDNA3.1(+)在EVC304细胞中瞬时表达HT036蛋白,转染了HT036基因的EVC304细胞为试验组(重复两次);没有转染HT036基因的细胞为对照组,用流式细胞仪检测HT036基因对细胞凋亡和细胞周期的影响.结果:①HT036基因全长克隆及生物信息学分析结果:利用RACE技术成功获得HT036基因的全长,并在GENEBANK进行了注册,注册号AY775560.②免疫共沉淀和Western-blot的验证结果:证实HT036蛋白能与内皮抑制素在真核细胞中相互作用.③HT036基因对细胞凋亡和细胞周期的影响:成功构建了表达HT036基因的真恢表达载体,两次试验转染ECV304细胞后24 h的凋亡率平均为23.63%,而对照组仅为0.10%.结论:获得了一与内皮抑制素相互作用的新的蛋白HT036基因的全长,初步表明HT036参与了内皮抑制素调节的血管生成过程,并对血管上皮细胞具有促进凋亡的作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈良安	解放军总医院呼吸科	173	999	16.0	24.0
2	刘又宁	解放军总医院呼吸科	367	2196	23.0	32.0
3	孙敬芬	解放军总医院血液科	15	25	3.0	4.0
4	曹璐	解放军总医院呼吸科	20	177	7.0	13.0
5	范保星	解放军总医院呼吸科	14	36	3.0	5.0
6	张宝林	解放军总医院科研处	2	1	1.0	1.0