摘要:
目的:体外采用叶酸对人肝癌细胞株SMMC-7721进行处理,分析叶酸抑制人肝癌细胞生长的作用.方法:实验于2003-09/2005-08在重庆医科大学完成.①人肝癌细胞SMMC-7721细胞株由四川大学华西校区分子生物学教研室提供;人胚肌腱细胞由四川大学华西校区分子生物学教研室提供.②细胞生长实验:常规培养细胞,待处于对数生长期时接种于24孔培养板内,每孔调整细胞数为1×104个,共分7组:加入叶酸,使各组叶酸的终浓度分别为15,75,375,750,1 875 nmol/L;加入顺铂,使顺铂组的终浓度为33 nmol/L;以未加受试物、只单纯加入培养基为阴性对照组.通过绘制生长曲线计算各组细胞的增殖抑制率.③四唑盐比色实验:取对数生长期生长状态良好的SMMC-7721和人胚腱细胞,分别接种于96孔培养板,共分7组:加入叶酸,使各组叶酸的终浓度分别为15,75,375,750,1 875 nmo1/L;加入顺铂,使顺铂组的终浓度为33 nmol/L;以未加受试物、只单纯加入培养基为阴性对照组.继续培养24 h后加入四唑盐(5 g/L,20 μL/孔)孵育.通过酶联免疫检测仪计算平均吸光度值和抑制率.④流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率.结果:①叶酸对人肝癌细胞株体外增殖的影响:叶酸浓度为75,375,750,1 875 nmol/L时可显著抑制SMMC-7721细胞的增殖(P<0.05);随时间的延长和剂量的增加,SMMC-7721细胞的抑制率呈上升趋势,其生长曲线较阴性对照下移.②叶酸对肝癌细胞、人胚肌腱细胞活性及功能状态的影响:叶酸对人胚肌腱细胞的活性和功能状态无影响,但对人肝癌细胞株有抑制作用.③叶酸对SMMC-7721细胞周期各时相分布及凋亡率的影响:与S期及G/M期比较,G0/G1期细胞比例增大(P<0.01或P<0.05),使其受阻于G0/G1期,细胞生长停滞,细胞凋亡率随浓度的增加而明显上升.结论:叶酸对人胚肌腱细胞无抑制作用,表明叶酸对正常人体细胞无不良影响;但叶酸对癌细胞存在明显的抑制作用.