血管生成抑制因子METH-1腺病毒载体的构建

• 作者: 宋革 张燕 张阳 江儒章 葛坚
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 腺病毒科 重组,遗传 绿色荧光蛋白质类 血管生成抑制剂
• 年，卷（期）: 2006,（45）
• 所属期刊栏目: 组织工程研究
• 页码范围: 97-99,插5
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 4748字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2006.45.041

摘要

目的:利用大肠杆菌同源重组构建重组腺病毒载体并在293细胞制备高滴度的病毒.方法:实验于2004-08/2005-08在中山大学眼科中心国家重点实验室完成.自真核表达载体pMD18-T-METH1中酶切出METH1基因,亚克隆至带有增强型绿色荧光蛋白表达盒的腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,形成转移质粒pAdTrack-CMV-METH1,在大肠杆菌BJ5183内与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1同源重组,得到重组腺病毒载体pAd-METH1.以pAd-METH1为模板,经DNA测序正确后,用PacI酶切线性化pAd-METH1,转染293细胞,包装成重组病毒颗粒,荧光显微镜观察转染细胞增强型绿色荧光蛋白的表达,采用聚合酶链反应方法对重组腺病毒进行鉴定.结果:①构建了携带外源基因人血管生成抑制因子的穿梭载体pAdTrack-CMV-METH1.②制备了METH1重组腺病毒载体pAdEasyMETH1.③METH1重组腺病毒可感染293细胞并在293细胞中进行有效的复制.结论:应用细菌内同源重组能够快速构建腺病毒载体,制备高滴度重组病毒,为METH1基因功能研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	葛坚	中山大学眼科中心	105	969	16.0	25.0
2	张阳	解放军第四五八医院整形科	21	74	4.0	8.0
3	江儒章	中山大学眼科中心	5	20	2.0	4.0
4	张燕	解放军第四五八医院整形科	80	212	7.0	10.0
5	宋革	中山大学眼科中心	2	8	2.0	2.0