摘要:
目的:检测生长分化因子5在小鼠肢芽组织的表达,分析该基因在肢体骨骼发育中的表达变化,从而进一步认识生长分化因子5基因在肢体发育过程中的作用.方法:实验于2005-05/07在华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科实验室完成.选取清洁级2~3月龄昆明种小鼠30只,雌性20只,雄性10只,于每天下午6时按雌雄2:1合笼,次日晨8时取出,查见阴道栓者定为孕期第0.5天.分别在胚胎11.5,12.5,13.5,14.5,15.5 d颈椎脱臼处死孕鼠,无菌条件下分离出胚胎,解剖显微镜下用眼科剪取肢芽组织备用.分别采用反转录聚合酶链反应和Western blotting免疫印迹法检测生长分化因子5在小鼠胚胎发育过程中肢芽组织mRNA和蛋白表达的变化.结果:①小鼠胚胎肢芽组织生长分化因子5 mRNA的表达:孕11.5,12.5,13.5,14.5,15.5d胚胎肢芽组织均可见一条219 bp的生长分化因子5特异扩增条带,其与β-actin吸光度的比值分别为0.521±0.023,1.210±0.014,1.221±0.008,0.556±0.014,0.510±0.019.孕12.5 d和孕13.5 d生长分化因子5 mRNA的相对含量与孕11.5,14.5,15.5 d相比有极显著性差异(P<0.01).②小鼠胚胎肢芽组织生长分化因子5蛋白的表达规律:孕11.5,12.5,13.5,14.5,15.5 d胚胎肢芽组织均观察到相对分子质量为13 700的蛋白条带,其与β-actin蛋白吸光度的比值分别为0.589±0.021,1.103±0.124,1.112±0.001,0.601±0.015,0.552±0.006.孕12.5 d和孕13.5 d生长分化因子5 mRNA的相对含量与孕11.5,14.5,15.5 d相比有极显著性差异(P<0.01).结论:生长分化因子5 mRNA及其蛋白表达的变化趋势一致,在小鼠肢体骨骼发育早期阶段持续表达,孕12.5 d和孕13.5 d呈高表达,继而减弱.表明生长分化因子5是肢体骨骼发育早期的一个关键因子,在小鼠肢体骨骼发育和关节形成中具有重要作用.