胰岛细胞瘤相关蛋白2胞内区与IgG Fc段融合基因疫苗的构建及鉴定

• 作者: 刘煜 吴海玮 季旻珺 张媛媛 朱翔 胡姝颖
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 腺瘤,胰岛细胞 基因 疫苗 反转录聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2006,（20）
• 所属期刊栏目: 癌症康复相关基础研究
• 页码范围: 80-83
• 页数: 4页
• 分类号: R736.7
• 字数: 5281字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2006.20.046

摘要

目的:构建及鉴定胰岛细胞瘤相关蛋白2胞内区(mIA-2i)和IgG Fc嵌合蛋白的真核表达载体pEGFP-N2/mIA-2i-mIgG Fc.方法:实验于2004-09/2005-07在南京医科大学病原生物学系完成.①采用反转录-聚合酶链反应方法从ICR小鼠的脑组织和脾脏中分别扩增胰岛细胞瘤相关蛋白2胞内区(mIA-2i)和IgG Fc段(mIgG Fc),并引入相应的酶切位点(XhoⅠ/BamHⅠ和BamHⅠ/EcoR Ⅰ).②分别将扩增后的片段克隆入pUCm-T质粒,通过XhoⅠ/BamHⅠ双酶切和连接后,获得pUCm-T/mIA-2i-mIgG Fc重组质粒.③经过Xho Ⅰ/EcRⅠ双酶切后,将融合基因mIA-2i-mlgG Fc克隆入真核表达载体pEGFP-N2.通过酶切、聚合酶链反应及插入片段序列测定对重组质粒pEGFP-N2/mIA-2i-mIgG Fc进行鉴定.结果:①从ICR鼠的脑组织和脾脏中反转录-聚合酶链反应获得胰岛细胞瘤相关蛋白2胞内区和IgG Fc段.②通过基因工程操作,获得重组克隆质粒pUCm-T/mIA-2i和pUCm-T/mIgG Fc,并经酶切鉴定克隆成功.③获得重组克隆质粒pUCm-T/mIA-2i-mIgG Fc,经聚合酶链反应和双位点酶切鉴定重组成功.④获得重组质粒pFGFP-N2/mIA-2j-mIgG F(和pEGFP-N2/mIA-2j,经聚合酶链反应、酶切及测序鉴定证实特异性片断插入真核表达载体成功.结论:pEGFP-N2/mIA-2i-mIgG Fc真核表达载体的构建,为利用胰岛细胞瘤相关蛋白2基因疫苗预防非肥胖性糖尿病小鼠发生自身免疫性糖尿病的研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	季旻珺	南京医科大学病原生物学系	47	245	9.0	13.0
2	吴海玮	南京医科大学病原生物学系	41	336	10.0	17.0
3	朱翔	南京医科大学病原生物学系	11	93	4.0	9.0
4	刘煜	南京医科大学第一附属医院内分泌科	24	91	6.0	8.0
5	张媛媛	南京医科大学病原生物学系	56	301	10.0	15.0
6	胡姝颖	南京医科大学病原生物学系	7	19	3.0	4.0