明胶酶在脑胶质瘤大鼠中的活性

• 作者: 南雪 施双双 杨丽平 王韫芳 白慈贤 秦立蓬 裴雪涛 赵敬湘
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 脑肿瘤 神经胶质瘤 明胶酶类 免疫组织化学
• 年，卷（期）: 2006,（34）
• 所属期刊栏目: 神经再生相关基础研究
• 页码范围: 82-85,插图34-2
• 页数: 5页
• 分类号: R9
• 字数: 7335字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2006.34.036

摘要

目的:通过观察脑胶质瘤大鼠动物模型中明胶酶的活性变化,为以明胶酶为靶点的脑胶质瘤治疗奠定实验基础.方法:实验于2004-10/2005-12在解放军军事医学科学院野战输血研究所干细胞生物学研究室完成.9L大鼠胶质瘤细胞购自广州南方医科大学.①选取清洁级健康成年雄性Fisher344大鼠27只,24只建立大鼠脑胶质瘤模型,造模后随机数字表法分为建模后7,14,21,28 d组,6只/组,每组3只用于灌注固定做免疫组化分析,另3只用于反转录多聚酶链反应和明胶酶谱分析.剩余3只大鼠作为正常对照.②采用反转录多聚酶链反应技术、免疫组织化学和明胶酶谱等方法检测胶质瘤中明胶酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)和明胶酶9(matrix metalloproteinase 2,MMP-9)的活性变化.结果:实验选取清洁级健康成年雄性Fisher344大鼠27只,全部进入结果分析.①MMP-2和MMP-9 mRNA的表达:9L胶质瘤细胞中均可见MMP-2和MMP-9 mRNA的表达,MMP-2的表达量高于MMP-9;大鼠脑胶质瘤组织中可见两者mRNA的表达,而正常脑组织MMP-2 mRNA低表达,检测不到MMP-9 mRNA的表达;随着肿瘤的生长,MMP-9mRNA的表达量增高.②MMP-2和MMP-9免疫组织化学观察结果:9L胶质瘤细胞的免疫组化显示,MMP-2和MMP-9均呈现阳性染色,主要为胞浆和胞膜染色;肿瘤组织MMP-2和MMp-9染色阳性,为胞浆染色,在血管内皮和肿瘤侵袭边缘细胞胞阳性染色明显.随脑胶质瘤的生长,MMP-2和MMP-9染色程度加深.③MMP-2和MMP-9酶活性检测结果:9L细胞无血清培养上清中可见Pro-MMP2(Mr72000)与ProMMP9(Mr92000)及其活化形式active MMP-2(Mr66000)与activeMMP-9(Mr83 000)的表达,MMB-2的表达量较高;MMP-2酶原与活化的MMP-2在脑胶质瘤组织中明显表达,而在正常脑组织低表达.MMP-9酶原与活化的MMP-9在脑肿瘤组织中表达,正常脑组织中未检测到其表达.④MMP-2和MMP-9在肿瘤组织中的定位情况:脑胶质瘤组织冰冻切片原位明胶酶谱结果显示,肿瘤组织因表达活性的明胶酶降解载片上的明胶,致使不被染色,肿瘤部位很透亮.对侧脑组织因不表达明胶酶,不能降解明胶,被染黑.结论:脑胶质瘤模型中表达高活性的MMP-2和MMP-9,且与胶质瘤生长速度密切相关.