半胱氨酸蛋白酶3在局灶性脑缺血再灌注损伤皮质中的动态时空表达

• 作者: 刘怀军 李春岩 杨冀萍 王藏海 王黎
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 脑缺血 再灌注损伤 半胱氨酸蛋白酶类 线粒体 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2006,（34）
• 所属期刊栏目: 神经再生相关基础研究
• 页码范围: 64-66,封面
• 页数: 4页
• 分类号: R9
• 字数: 4590字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2006.34.030

摘要

目的:观察半胱氨酸蛋白酶3在局灶性脑缺血再灌注不同时间、灶周皮质的动态时空变化.方法:实验于2005-05/08在河北医科大学第二医院神经分子影像医学和神经病学实验室完成.①选择清洁级健康新西兰白兔66只,雄性,兔龄4.5～5个月,体质量(2.6±0.2)kg,采用兔大脑中动脉阻断局灶性脑缺血再灌注模型,随机分为假手术组(n=6),模型组(n=60),模型组按再灌注时间又分为6个时间点,即1 h、6 h、1 d、3 d、7 d、14 d,每个时间点10只大白兔,各时间点依方法不同又分为组织学检测组(n=5)和流式细胞术检测组(n=5).②采用免疫组化SP法检测皮质半胱氨酸蛋白酶3表达:应用Meta Morph显微图像分析系统于400倍光镜下随机观察并测量灶周皮质5个不重复视野神经细胞胞浆半胱氨酸蛋白酶3阳性表达光密度值,计算其平均数.③流式细胞术检测细胞凋亡率和灶周皮质半胱氨酸蛋白酶3的表达:经计算机分析系统,绘制细胞数DNA分布图,以二倍体峰前亚二倍体峰(凋亡峰)判定细胞凋亡,计算DNA断裂的凋亡细胞百分数(细胞凋亡率).④透射电镜取材和观察:开颅取脑后,立即取梗死灶周1 mm×1 mm×2 mm大小的标本,经过一系列处理后,在光镜下进一步确认已切到梗死灶周后,行超薄切片.醋酸铀、枸橼酸铅双重染色后,日立H-9000型透射电镜进行超微结构观察并照相.⑤结果行单因素方差分析.结果:66只大白兔全部进入结果分析.①免疫组化及流式细胞术分析发现,半胱氨酸蛋白酶3在2 h缺血再灌注l h迅速增多,并随再灌注时间延长而加剧,3 d达高峰,然后逐渐下降,14 d仍高于基线水平.②灶周皮质凋亡率和脱氧核苷酰转移酶法计数TUNEL阳性细胞数在再灌注1 h也逐渐增多,1～3 d达高峰,然后逐渐下降,14 d降至基线水平.③超微结构显示假手术组的细胞结构正常.再灌注3 d神经元损伤最重,7 d时形态有所改善.结论:半胱氨酸蛋白酶3活性表达在再灌注期先于凋亡发生前,并且其表达时程较长,是检测缺血再灌注凋亡的敏感指标,也是溶栓后治疗的靶点.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘怀军	河北医科大学第二医院影像科	295	1550	15.0	21.0
2	李春岩	河北医科大学第二医院神经内科	154	924	14.0	24.0
3	王藏海	河北医科大学第二医院影像科	51	173	7.0	9.0
4	杨冀萍	河北医科大学第二医院影像科	44	244	9.0	12.0
5	王黎	河北医科大学第二医院影像科	8	32	4.0	5.0