兔气管纤毛上皮细胞原代培养的生物学特性及其体外生长规律

• 作者: 刘智 孙永柱 崔鹏程 张龙芳 李贵泽 陈文弦
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 细胞培养 纤毛 上皮细胞 兔
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 干细胞研究
• 页码范围: 34-36
• 页数: 4页
• 分类号: R318
• 字数: 4510字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2006.01.014

摘要

目的:建立兔气管纤毛上皮细胞原代培养模型,观察其体外培养条件下的生物学特性并确定其体外生长规律.方法:实验于2005-03/07在解放军第四军医大学唐都中心实验室完成. ①纤毛上皮细胞提取及培养:日本大耳兔20只,利用酶消化法分离获取兔气管纤毛上皮细胞,无血清生长因子培养基(成分:DMEM:Ham'sF12为1:1,并加入以下激素及生长因子:10 mg/L胰岛素、5 mg/L转铁蛋白、20μg/L甲状腺素、0.4 mg/L氢化可的松、7.5 mg/L内皮细胞生长支持物、25 μg/L表皮生长因子、1 mmol//L-谷氨酰胺,100IU/mL青霉素,50 mg/L链霉素)体外培养. ②细胞纯度及鉴定:用抗角蛋白单克隆抗体进行SP法免疫细胞化学反应,二氨基联苯胺显色阳性为上皮细胞.扫描电镜观察细胞表面结构.结果: ①气管上皮细胞的分离:酶低温消化加刷洗法获得的气管上皮细胞数量较多,呈圆形,较大,悬浮旋转. ②气管上皮细胞生长状态和形态特征:套皿接种细胞24 h后,贴壁率约为60%,细胞增大,并进入分裂相.五六天后细胞增殖旺盛,部分无纤毛上皮细胞汇合呈多角形铺路石样相嵌生长,在相差显微镜下放大200～400倍清晰可见纤毛呈海葵样向心摆动活跃,第3周纤毛逐渐消失成遗迹,细胞凋亡. ③纤毛细胞的电镜观察:可见纤毛由细胞顶膜伸出,大部分集结成束,除纤毛外,还有稠密的较细短的微绒毛由细胞顶膜伸出. ④气道上皮细胞的免疫细胞化学鉴定:抗角蛋白单克隆抗体免疫组织化学染色阳性,细胞达(91±3)%.结论:酶消化法分离、无血清生长因子培养基培养,可以建立兔气管纤毛上皮细胞的原代培养模型,具有成为气管组织工程种子细胞的应用价值.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	崔鹏程	解放军第四军医大学唐都医院耳鼻咽喉科	22	129	7.0	10.0
2	陈文弦	解放军第四军医大学唐都医院耳鼻咽喉科	22	125	7.0	10.0
3	张龙芳	解放军第四军医大学唐都医院耳鼻咽喉科	3	12	3.0	3.0
4	孙永柱	解放军第四军医大学唐都医院耳鼻咽喉科	12	83	6.0	8.0
5	李贵泽	解放军第四军医大学唐都医院耳鼻咽喉科	11	81	6.0	8.0
6	刘智	解放军第四军医大学唐都医院耳鼻咽喉科	2	12	2.0	2.0