RTP801缺氧反应性核心序列调控下血管生长因子165和成纤维细胞生长因子2的高效共表达

• 作者: 张芳林 徐亚林 徐州 朱含章 王志广 苏鑫铭 范乐明 蒋玲琳 陈琪
• 来源期刊: 中国动脉硬化杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 病理学与病理生理学 血管生长因子165 成纤维细胞生长因子2 RTP801增强子 载体构建 基因表达
• 年，卷（期）: 2007,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 337-341
• 页数: 5页
• 分类号: R363
• 字数: 4407字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-3949.2007.05.005

摘要

目的 获取人血管内皮生长因子165基因和人成纤维细胞生长因子2基因,克隆基因损伤诱导转录物4基因启动子中的缺氧反应性核心序列,以含有内核糖体进入位点的单启动子双表达载体为骨架构建真核表达载体,转染人胚肾293细胞,观察在正常和缺氧下人血管内皮生长因子165和人成纤维细胞生长因子2的表达.方法 利用聚合酶链反应法从小鼠基因组中获取基因损伤诱导转录物4基因启动子的缺氧反应性核心序列337 bp～511 bp,替换含有内核糖体进入位点的单启动子双表达载体上的巨细胞病毒增强子(150 bp～390 bp).通过聚合酶链反应法获取含有人血管内皮生长因子165基因和人成纤维细胞生长因子2基因的片段,插入含有内核糖体进入位点的单启动子双表达载体中的多克隆位点中,构建重组质粒.利用生物性可降解的聚乙烯亚胺多分支树状聚合物将重组质粒体外转染人胚肾293细胞,在正常和缺氧条件下分别培养36 h,Western印迹法检测细胞内血管内皮生长因子165基因和人成纤维细胞生长因子2基因的表达,酶联免疫吸附法检测细胞培养基中分泌性蛋白血管内皮生长因子165和人成纤维细胞生长因子2的表达.结果 真核表达载体经聚合酶链反应和酶切分析及测序证实构建成功,Western印迹法和酶联免疫吸附法检测证实重组质粒中血管内皮生长因子165基因和人成纤维细胞生长因子2基因在基因损伤诱导转录物4基因缺氧反应性核心序列介导下在缺氧人胚肾293细胞有高效共表达.结论 获取的基因损伤诱导转录物4基因的缺氧反应性核心序列在缺氧状态下有增强下游基因表达的功能,含有该增强子的真核质粒在缺氧下高效表达血管内皮生长因子165和人成纤维细胞生长因子2.