实时RT-PCR基因表达相对定量REST(C)软件分析与2(-△△CT)法比较

• 作者: 刘建平 叶小明 庄志雄 庾蕾 张仁利 杨淋清 程锦泉
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 实时RT-PCR 相对定量 标准曲线 基因表达
• 年，卷（期）: 2007,（10）
• 所属期刊栏目: 基础研究论著
• 页码范围: 956-958
• 页数: 3页
• 分类号: R446.61
• 字数: 1984字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3619.2007.10.006

摘要

目的 利用实时RT-PCR技术建立一种简便、准确的基因表达相对定量方法.方法 以正常的人支气管上皮细胞株(16HBE)cDNA为模板5倍系列稀释,分别作DNA聚合酶K(POLK)和磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因标准曲线.以不同剂量反式二羟环氧笨并芘(anti-BPDE)诱导的16HBE、anti-BPDE转化的16HBE及肺癌细胞株(H1299)cDNA为模板,进行实时定量RT-PCR.以GAPDH基因作为内参照.进行POLK基因表达相对定量.实验数据分别采用2(-△△CT)法及REST(C)软件分析.结果 5倍系列稀释法制作的标准曲线,呈现较好的线型关系(Rsq 0.997).POLK及GAPDH基因扩增效率分别为117.5%和103.5%.采用2(-△△CT)法计算出的表达比值均比REST(C)软件分析高.结论 实时RT-PCR技术结合REST(C)软件分析是一种简便、准确的基因表达相对定量分析手段.