Trx-NAP 5融合蛋白在大肠杆菌中的表达及其活性检测

• 作者: 付汉维 吴亚敏 彭礼飞 杨陈 胡晶晶 邓莉
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 医学
• 关键词: 线虫抗凝血肽5(rNAP 5) 融合蛋白 大肠杆菌 表达
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 11-14
• 页数: 4页
• 分类号: Q784|R973
• 字数: 4767字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-311X.2007.01.004

摘要

目的:用大肠杆菌表达获得重组线虫抗凝血肽5(rNAP 5),为研究开发NAP5的功能与应用提供原料来源.方法:将扩增的NAP5基因经BamH Ⅰ和HindⅢ双酶切后与表达载体pET-32a连接.构建好的重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)后,分别经IPTG和乳糖诱导表达,并探讨诱导表达条件,分析表达产物的可溶性情况.表达产物经镍亲和纯化后,用凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血活酶时间(aPTT)检测体外抗凝活性.结果:成功构建了pET-32a/NAP5表达载体,IPTG和乳糖均能诱导目的蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中高效地可溶性表达.优化条件下每升LB培养基可获可溶性目的融合蛋白量达65.3mg.纯化的蛋白能明显延长PT及aPTT,7.0mg/L的蛋白平均约延长5.09倍aPTT,2.55倍PT.结论:在大肠杆菌中成功表达了具有很好生物活性的Trx-NAP5融合蛋白,为研究开发NAP5的功能与应用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨陈	广东医学院寄生虫学教研室	19	91	6.0	8.0
5	彭礼飞	广东医学院寄生虫学教研室	35	155	7.0	10.0
6	邓莉	广东医学院寄生虫学教研室	23	72	6.0	7.0
7	胡晶晶	广东医学院寄生虫学教研室	7	38	4.0	6.0
8	吴亚敏	广东医学院寄生虫学教研室	11	45	4.0	6.0
9	付汉维	广东医学院寄生虫学教研室	3	16	2.0	3.0