鼠源性抗雄性特异性抗原噬菌体Fab抗体库的构建

• 作者: 王乃东 薛立群 袁安文 许道军 邓治邦
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 小鼠 H-Y抗原 噬菌体展示技术 抗体库
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 所属期刊栏目: 遗传繁育
• 页码范围: 344-351
• 页数: 8页
• 分类号: Q782
• 字数: 5825字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0366-6964.2007.04.006

摘要

利用雄鼠脾细胞免疫6～7周龄C57BL/6雌鼠,加强免疫后取脾细胞,TRIZOL法提取细胞总RNA,并逆转录合成cDNA第一条链.以其为模板,利用特异性Ig基因的引物PCR扩增出重链Fd片段和κ链基因,并将扩增出基因重组到噬质粒载体pComb3中,重组噬质粒转化大肠杆菌XL1-Blue中,分别构建κ链基因库和抗体Fab段基因库.分别经蓝白斑筛选,计算转化效率,通过PCR反应和双酶切反应鉴定抗体库的重组率,轻链、重链Fd段基因的重组率均为80%.抗体Fab段基因库经过辅助噬菌体VCSM13超感染,成功构建了鼠源性噬菌体Fab抗体库,并测定噬菌体抗体库的库容和滴度,结果分别为1.5×107,3.2×1011 pfu/mL.对噬菌体抗体库的18个克隆进行ELISA分析,结果显示以雄鼠脾细胞作为抗原时,有9个克隆含有雄性特异性的噬菌体抗体,而以雄鼠睾丸细胞作为抗原时,有8个克隆与睾丸细胞呈现结合活性.噬菌体抗体库的构建为雄性特异性抗原的鼠源性噬菌体抗体Fab片段的筛选及其应用、雄性特异性抗原和抗体功能性分子基础的研究奠定了坚实基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王乃东	湖南农业大学动物医学院	34	62	4.0	5.0
5	薛立群	湖南农业大学动物医学院	107	518	12.0	15.0
9	袁安文	湖南农业大学动物医学院	51	159	7.0	10.0
10	许道军	湖南农业大学动物医学院	44	73	5.0	6.0
11	邓治邦	湖南农业大学动物医学院	59	182	7.0	10.0