反向重复RNA介导转基因烟草对花生条纹病毒抗性

• 作者: Marcel Prins Rob Goldbach 晏立英 许泽永 陈坤荣
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 花生条纹病毒 dsRNA 反向重复序列 抗性 siRNA
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 702-707
• 页数: 6页
• 分类号: S188
• 字数: 3974字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2007.04.030

摘要

将花生条纹病毒(Peanut strpe virus,PStV)外壳蛋白基因(cp)反向重复序列重组至植物表达载体pK7GW1WG2,通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株GV3101导入本生烟(Nicotiana benthamiana).卡那霉素抗性植株5～6叶期摩擦接种PStV,通过症状观察和ELISA检测,T0代转基因烟草植株87%表现免疫,不同抗性系T1代植株的免疫比例为60%～100%,多数抗性系T2代植株免疫比例达到100%.利用PStV cp基因特异探针对转基因植株T1代进行特异小干扰性RNA(siRNA)的Northern blot检测,转基因植株都检测出不同含量的特异siRNA,而非转基因植株未检测到特异siRNA;对病毒接种前的转基因植株进行特异siRNA检测,免疫植株比感病植株特异siRNA含量高;对免疫转基因植株进行不同时期的siRNA检测,植株在接种前、接种15和50 d后的叶片中都检测到特异siRNA,同一植株不同时期siRNA含量相对稳定;各个转化系植株体内siRNA含量存在差异.实验成功地利用双链RNA(dsRNA)策略获得对PStV具有较高比例抗性的转基因烟草植株.