SYBR Green I实时定量PCR方法检测2型猪圆环病毒

• 作者: 何孔旺 潘群兴 黄克和
• 来源期刊: 扬州大学学报（农业与生命科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: 2型猪圆环病毒 实时荧光定量PCR 标准曲线
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 页码范围: 13-17
• 页数: 5页
• 分类号: S858.28|S852.65
• 字数: 3488字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-4652.2007.03.004

摘要

利用PCR技术扩增出2型猪圆环病毒(PCV) ORF2保守区基因107 bp片段,并克隆到pMD-19-T载体上,纯化的质粒作为PCR检测的标准模板,以10倍梯度稀释质粒为标准模板,进行荧光定量PCR, 并绘制标准曲线.再以提取的PCV-2、PCV-1、猪细小病毒(PPV)和猪伪狂犬病毒(PRV)的DNA作为模板,采用同样体系进行实时PCR检测.结果表明: 建立的实时定量PCR方法,起始模板浓度与样本阈值循环数(Ct)值之间呈很好的线性关系,标准曲线斜率为-0.32, 相关系数r2为0.997, Ct值为11.9～26.9.PCV-2能扩出S型荧光曲线,熔解曲线的峰狭窄单一,而PCV-1、PPV和PRV均不能扩出.对32份健康猪和32份断奶仔猪多系统消耗综合征(PMWS)可疑猪样品定量检测:健康猪阳性率为44%(14/32), 病毒载量均小于104拷贝·μL-1; PMWS可疑猪阳性率96.8%(31/32), 病毒载量均大于105拷贝·μL-1.实时荧光定量PCR方法可用于2型猪圆环病毒定性及定量的检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何孔旺	江苏省农业科学院兽医研究所	101	1368	22.0	33.0
2	黄克和	南京农业大学动物医学院	159	1947	23.0	35.0
3	潘群兴	江苏省农业科学院兽医研究所	8	38	4.0	6.0