基于BAC同源重组高效构建小鼠胚胎干细胞Nanog基因报告体系

• 作者: 丁明孝 尤洁芳 杜立颖 童攒 范彦 邓宏魁 邹方东
• 来源期刊: 科学通报
• 学科: 医学
• 关键词: 小鼠胚胎干细胞 自我更新 Nanog EGFP 细菌人工染色体 同源重组
• 年，卷（期）: 2007,（15）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 1763-1770
• 页数: 8页
• 分类号: R3
• 字数: 7245字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0023-074x.2007.15.009

摘要

Nanog是最新发现的一个在胚胎干细胞(ES细胞)中特异表达, 并在保持ES细胞多能性的机制中有重要作用的转录因子. Nanog基因的表达能非常灵敏地随ES细胞的分化而下调, 使之成为指示ES细胞多能性最理想的标志基因之一. 本研究基于细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome, BAC)同源重组技术, 并改进了将报告基因敲入目的位点的重组方案, 高效构建了小鼠ES细胞(mES细胞)的Nanog/EGFP报告体系. 基因打靶后的mES细胞具有与其源mES细胞相同的特性, 并能稳定地将Nanog与EGFP (enhanced green fluorescence protein)的表达偶联. 此报告体系能通过EGFP的表达有效报告Nanog基因的表达水平, 从而对mES细胞分化或未分化状态作出明显指示. 本研究为mES细胞自我更新和分化的研究提供了一个理想的实验体系, 不仅能用于进一步优化mES细胞的培养体系, 对研究Nanog的表达调控及其与其他维持mES细胞多能性的因子和途径之间的关系也有深远的意义.