端锚酶反义寡核苷酸联合反义端粒酶催化亚单位对人肺腺癌A549细胞端粒动力学的影响

• 作者: 卢宏达 孔庆志 甄燕 申雯竹 黄涛
• 来源期刊: 癌症
• 学科: 医学
• 关键词: 端粒长度 端锚酶 端粒酶催化亚单位 反义寡核苷酸 A549细胞
• 年，卷（期）: 2007,（11）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1164-1169
• 页数: 6页
• 分类号: R73
• 字数: 4918字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-467x.2007.11.003

摘要

背景与目的:端锚酶是真核生物体内的一种重要的功能蛋白,对调节细胞端粒长度及参与细胞衰老和永生化过程起着重要的作用.本研究探讨端锚酶及端粒酶反义寡核苷酸联合作用对人肺腺癌A549细胞端粒相关蛋白表达和翻译的影响,以及对端粒缩短效能和细胞周期的作用.方法:将培养的A549细胞分为空白对照组、端锚酶正义寡核苷酸对照(tankyrase sense oligonucleotide,sTANKS)、端粒酶催化亚单位正义寡核苷酸对照组(human telomerase reverse transcriptase sense oligonucleotide,shTERT)、端锚酶反义寡核苷酸实验组(tankyrase antisense oligonucleotide,asTANKS)、端粒酶催化亚单位反义寡核苷酸实验组(human telomerase reverse transcriptase antisense oligonucleotide,ashTERT)、端锚酶及端粒酶催化亚单位反义寡核苷酸联合实验组(asTANKS+ashTERT).分别与不同的正、反义寡核苷酸作用,采用RT-PCR(reverse transcription-polymerase chain reaction)法观察端粒酶催化亚单位的mRNA表达,ELISAPCR法测定端粒酶活性,Western blot法观察端锚酶活性,Q-FISH法检测各组端粒的平均长度;并通过传代实验观察不同正、反义寡核苷酸对A549细胞传代寿命的影响.结果:ashTERT能明显抑制端粒酶催化亚单位的mRNA表达及蛋白质活性,不影响端锚酶活性;作用48h后细胞平均端粒长度明显缩短[(7.59±0.07)kb];细胞在经过56.92±0.46个倍增时间(population double,PD)连续培养终止.asTANKS不影响端粒酶催化亚单位mRNA表达及蛋白质活性,却能明显抑制端锚酶活性;作用48h后细胞平均端粒长度明显缩短[(7.33±0.09)kb];细胞在经过(53.33±0.57)PD连续培养终止.ashTERT+asTANKS联合作用同时抑制端粒酶和端锚酶.其细胞平均端粒长度缩短更为明显[(3.55±0.08)kb],流式直方图上FITC荧光"左偏"更显著,与ashTERT、asTANKS比较差异有显著性(t=37.33、32.50,P＜0.001);ashTERT+asTANKS组细胞在经(24.53±0.40)PD后培养终止,与ashTERT、asTANKS比较差异也有显著性(t=53.38、43.39,P＜0.001).结论:端锚酶反义寡核苷酸对A549细胞端粒长度的抑制有别于端粒酶途径,它不仅能通过影响端锚酶活性,缩短A549细胞端粒的平均长度,而达到缩短肿瘤细胞生存寿命的目的;而且可与端粒酶抑制剂产生协同作用,明显缩短肿瘤细胞的生存周期,可能成为抗癌作用的新靶点.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孔庆志	武汉市普爱医院肿瘤科	12	334	8.0	12.0
2	卢宏达	湖北中医学院中医系	6	72	4.0	6.0
4	甄燕	武汉市普爱医院检验科	6	40	4.0	6.0
7	申雯竹	武汉市普爱医院检验科	3	19	3.0	3.0
8	黄涛	武汉市普爱医院肿瘤科	5	59	4.0	5.0