PEP-1肽介导人Cu,Zn-SOD转导入大鼠离体缺血再灌注损伤心脏

• 作者: 唐俊明 杨建业 柯尊平 王家宁 王磊 郭凌郧 黄永章
• 来源期刊: 武汉大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: PEP-1肽 铜,锌-超氧化物歧化酶 蛋白转导 心肌细胞 缺血再灌注损伤
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 450-455,后插1
• 页数: 7页
• 分类号: Q78
• 字数: 5021字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8852.2007.04.011

摘要

目的:构建原核表达载体pET15b-PEP-1-SOD1,观察PEP-1-SOD1融合蛋白在大鼠离体缺血再灌注损伤心肌组织内的转导能力和转导的目的蛋白是否具有酶活性.方法:构建原核表达载体pET15 b-SOD1和pET15b-PEP-1-SOD1,分别转化大肠杆菌,表达和纯化SOD1和PEP-1-SOD1融合蛋白.采用Langendorff灌流系统,大鼠离体心脏停灌30 min后复灌60 min建立缺血再灌注损伤模型.实验分为对照组,SOD1组,25,50,100 μmol/L PEP-1-SOD1组.免疫荧光检测PEP-1-SOD1的转导效果, SOD试剂盒检测酶活性.结果:在荧光显微镜下,PEP-1-SOD1融合蛋白预处理组心肌组织中可见特异性的绿色荧光位于心肌细胞胞质内,25 ,50,100 μmol/L组阳性率分别为32.6%,42.5%,60.9%.SOD1蛋白预处理组和对照组未见到绿色荧光.与对照组相比,PEP-1-SOD1各组SOD酶活性均显著增加(P＜0.01),且SOD酶活性与PEP-1-SOD1浓度呈正相关, SOD1组与对照组之间无显著性差异(P＞0.05).结论:PEP-1-SOD1融合蛋白以天然有活性的形式穿透进入大鼠离体缺血再灌注损伤的心肌细胞,且具有剂量依赖性.转导入细胞内的PEP-1-SOD1蛋白具有酶活性.本研究为SOD1治疗由氧化应激所导致的各种疾病提供了一种有效的递送途径.