Persephin基因转染对缺氧诱导神经干细胞凋亡的影响

• 作者: 叶剑虹 沈庆煜 王艺东 肖颂华 黎祥喷
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: Persephin 凋亡 神经干细胞
• 年，卷（期）: 2007,（24）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 4819-4823
• 页数: 5页
• 分类号: R394.2
• 字数: 3093字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.24.014

摘要

背景:如何抑制或减少神经干细胞凋亡的发生,促进缺氧后神经干细胞的存活,成为脑梗死神经干细胞移植治疗的研究热点.目地:观察在缺氧状态下转染人类persephin基因对神经干细胞凋亡的作用.设计:完全随机分组,对照实验.单位:中山大学附属第二医院神经内科.材料:实验于2006-07/2006-12在中山大学附属第二医院林百欣实验中心完成,重组腺病毒pAd persephin由本实验室构建保存,C17.2神经干细胞由美国哈佛大学医学院Snyder教授惠赠.胰蛋白酶、DMEM/F12购自Gibco公司;胎牛血清来自杭州四季青生物工程公司;多聚赖氨酸购自美国Sigma公司;TUNEL检测试剂盒,阳离子脂质体FuGENE购自瑞士Roche公司;S-P免疫组化试剂盒及DAB显色剂购自福建迈新生物工程公司;鼠抗人Nestin单抗,Persephin兔抗人多抗购自美国Santa Crus公司,persephin反义寡核脱氧苷酸由上海生工合成.方法:①实验干预:将携带人类Persephin基因的重组腺病毒感染C17.2神经干细胞,分为4组,A组:正常对照组,C17.2神经干细胞不作缺氧处理.B组:缺氧处理组,即置于37 ℃、体积分数0.95 N2,体积分数0.05 CO2厌氧培养箱培养.C组:缺氧+pAdpersiphin转染组,即:将携带人类Persephin基因的重组腺病毒感染C17.2神经干细胞,pAdpersiphin转染48 h后的细胞置同B组条件的厌氧培养箱培养.D组:缺氧+pAdpersiphin转染组+persiphin反义寡核脱氧苷酸,即pAdpersiphin+persiphin反义寡核脱氧苷酸转染.②实验评估:Western-blotting法分析Persephin蛋白的表达;TUNEL法检测凋亡指数;流式细胞术测定细胞凋亡率的变化.主要观察指标:Persephin蛋白的表达、细胞凋亡指数和凋亡率.结果:①Persephin蛋白表达:C组细胞经Western blot检测可见一特异性蛋白条带存在,Mr约为24 000,符合预期结果,说明persiphin成功表达,D组亦可见一M(1) 24 000的条带,但条带较单纯pAdpersiphin感染组明显为淡,说明反义persiphin反义寡核脱氧苷酸可成功抑制pAdCMVpersiphin的表达.②细胞凋亡指数:C组凋亡细胞明显减少,凋亡指数低于B、D组(P＜0.01),但高于A组(P＜0.01),表明细胞凋亡未完全避免.③细胞凋亡率:B、D组凋亡率明显高于A组(P＜0.01),C组明显较B组、D组低(P＜0.01).结论:腺病毒介导的Persephin基因能高效表达Persephin;外源性Persephin对C17.2神经干细胞具有抗凋亡作用,能够提高C17.2神经干细胞对缺氧的耐受性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	肖颂华	中山大学附属第二医院神经内科	55	199	7.0	9.0
2	沈庆煜	中山大学附属第二医院神经内科	36	169	6.0	11.0
3	黎祥喷	中山大学附属第二医院神经内科	30	98	6.0	8.0
4	王艺东	中山大学附属第二医院神经内科	41	216	7.0	12.0
5	叶剑虹	中山大学附属第二医院神经内科	18	63	5.0	7.0