蛋白质组学方法筛选维甲酸耐药相关蛋白

• 作者: 刘霆 宋鑫 杨金亮 柳斌 秦慧 赵霞 魏于全 黄欣
• 来源期刊: 中华医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 维甲酸 蛋白质组 电泳,凝胶,双向 抗药性 白血病,髓样
• 年，卷（期）: 2007,（8）
• 所属期刊栏目: 白血病基因与蛋白质组研究
• 页码范围: 520-525
• 页数: 6页
• 分类号: R73
• 字数: 5586字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:0376-2491.2007.08.006

摘要

目的 比较维甲酸耐药细胞与敏感细胞的差异蛋白表达谱,分析、筛选维甲酸耐药相关蛋白.方法 双向凝胶电泳分离维甲酸耐药细胞株MR2及维甲酸敏感细胞株NB4的全蛋白,经PDQuest v7.1分析软件筛选出差异表达的蛋白质点,质谱分析获得差异蛋白质的肽质量指纹图谱,以此通过Mascot软件查询SWISS-PROT蛋白数据库,进行差异蛋白质的鉴定,获得候选维甲酸耐药相关蛋白.采用蛋白质印迹试验及半定量RT-PCR在蛋白水平和mRNA水平对差异蛋白质进行验证.结果 获得了分辨率高、重复性好的APL细胞的双向电泳图谱,维甲酸耐药细胞株MR2及维甲酸敏感细胞株NB4的pH4-7双向凝胶电泳图谱显示平均蛋白点分别为890±45和912±56.在二者间分析到57个差异蛋白点,23个蛋白点在RA耐药细胞株MR2中上调,34个蛋白点下调.25个差异蛋白点经质谱鉴定,17个获得成功鉴定,对应于13个不同分子,其中一个是未知功能的新蛋白FLJ00279,其余分属于癌蛋白(DJ-1),转录相关蛋白(MYC启动子结合蛋白1),分子伴侣[热应激蛋白(HSP)HSP70、HSP60及蛋白质二硫键异构酶],代谢类蛋白(抑制素、磷酸丙糖异构酶1及钙网蛋白)和信号转导(Rho GDP dissociation inhibitor beta)以及细胞骨架蛋白(ACTG1蛋白、β-5-微管蛋白抑制素及角蛋白10).癌蛋白DJ-1、calreticulin、HSP60及ACTG1在RA耐药细胞株MR2中为高表达,其余为低表达.蛋白印迹试验结果与双向电泳结果一致且展现了DJ-1和calreticulin在多个异构体上有差异表达.但半定量RT-PCR显示HSP70和HSP60的蛋白质表达差异与其mRNA水平变化无相关一致性.两种实验结果提示翻译后蛋白的修饰或剪切介导了蛋白的表达差异.结论 应用双向凝胶电泳连接质谱的蛋白质组学方法筛选到新蛋白FLJ00279以及功能已知的DJ-1、calreticulin、HSP70、HSP60、抑制素及MYC启动子结合蛋白1等维甲酸耐药相关蛋白,虽然它们与维甲酸耐药的直接关系还需进一步证实,但为从多因素角度上认识维甲酸耐药机制提供了新的线索.