农杆菌介导的转化芦荟的研究

• 作者: 何聪芬 叶兴国 张佳星 杜丽璞 董银卯 赵华 陈杰
• 来源期刊: 遗传学报
• 学科: 农学
• 关键词: 芦荟 农杆菌 遗传转化 分子检测 ELISA检测
• 年，卷（期）: 2007,（12）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 1053-1060
• 页数: 8页
• 分类号: S6
• 字数: 1851字
• 语种: 中文

摘要

芦荟(Aloe)是美容和医疗保健工业的重要植物资源,然而基因工程途径改良芦荟鲜有报道.本实验研究了次氯酸钠、升汞不同浓度和时间对芦荟外植体的灭菌效果,比较了芦荟不同部位(叶片、叶鞘和茎段)的再生能力,利用GUS基因瞬间表达技术(X-Gluc染色)探讨了不同农杆菌对不同芦荟外植体的侵染效果,确定了G418筛选剂在芦荟转化后的最适筛选浓度,摸索了适宜于农杆菌-芦荟共培养用培养基组成和共培养条件,通过转化、筛选和移栽共获得了67棵抗性再生植株,进一步对抗性再生植株进行了PCR、Southern blotting和ELISA检测.结果表明,芦荟外植体灭菌方法为20.0%次氯酸钠溶液浸泡25 min,效果优于利用0.1%升汞灭菌处理,茎部切段的再生能力高于叶片切段和叶鞘切段,适宜的共培养条件为芦荟外植体浸泡在含有农杆菌的液体共培养基中半小时后,在无菌滤纸上、24℃、10h光照共培养3天;EHA105农杆菌菌系对芦荟茎部细胞的侵染能力明显强于C58C1,EHA105侵染后GUS基因瞬时表达率达到了80.0%左右,而C58C1侵染后GUS基因瞬时表达率只有30.0%左右.G418用于筛选抗性再生芽和抗性植株的适宜浓度为10.0～25.0 mg/L.PCR和Southern blotting检测证实外源基因已成功整合到芦荟基因组中,转化效率为0.9%,单拷贝整合占80.0%,2～3拷贝整合占20.0%,ELISA检测证明外源基因已在转基因芦荟中稳定表达.综上所述,初步建立了农杆菌介导转化芦荟的技术体系,为利用基因工程途径改良芦荟奠定了基础.