结核分枝杆菌H37Rv组氨醇脱氢酶基因的克隆、表达及酶学性质分析

• 作者: 刘瑞卿 徐胜凤 曹健 淳于利娟 王洪海 王虹军 许云敏 金瑞良
• 来源期刊: 复旦学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 结核分枝杆菌 L-组氨醇脱氢酶 NADH L-组氨醇
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 页码范围: 384-389
• 页数: 6页
• 分类号: Q786|Q936
• 字数: 4760字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0427-7104.2007.03.022

摘要

以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,扩增hisD基因,构建pET-28a-HDH重组质粒;转化重组质粒到E.coli BL21(DE3)并诱导表达, 纯化可溶性的结核分枝杆菌L-组氨醇脱氢酶(HDH),并对其性质进行研究,结果表明:重组结核分枝杆菌L-组氨醇脱氢酶能以L-组氨醇和NAD+为底物催化L-组氨醇生成L-组氨酸;该酶的最适pH值为8.3,最适温度为45 ℃,比活力为1.788 U/mg;Mn2+,Ca2+,Zn2+,Co2+等对酶促反应有激活作用;底物NAD+和L-组氨醇的米氏常数分别为0.9765 mmol/L和2.755 μmol/L;25 ℃时重组蛋白的二级结构中有20.5%的α-螺旋,40.9%β-折叠,4.2%β-转角,34.3%无规卷曲.