RNA干扰抑制胸膜间皮细胞水通道蛋白1表达的实验研究

• 作者: 严英硕 张伟 朱智文 李志平 杜宏春 谢灿茂
• 来源期刊: 中华医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 胸膜 上皮细胞 基因表达 RNA干扰 水通道蛋白1
• 年，卷（期）: 2007,（25）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1773-1777
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 4648字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0376-2491.2007.25.013

摘要

目的 研究RNA干扰技术对大鼠胸膜间皮细胞水通道蛋白1(AQP1)基因表达的影响,探讨应用该技术治疗胸腔积液的可行性.方法 体外培养大鼠胸膜间皮细胞,细胞鉴定后,采用免疫细胞化学、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测AQP1表达;设计并构建2个靶向大鼠AQP1基因的短发夹RNA(shRNA)重组质粒,脂质体转染大鼠胸膜间皮细胞48 h后,采用RT-PCR及Western印迹方法分别在mRNA和蛋白质水平检测AQP1基因表达的抑制效果.结果 胸膜间皮细胞存在AQP1表达,所设计的2个AQP1-siRNA重组质粒可不同程度地抑制AQP1在胸膜间皮细胞中的表达,在mRNA水平抑制率分别为83.5%和90.9%;在蛋白质水平抑制率分别为41.2%和67.6%,与空白对照组和阴性对照组比较,其差异有统计学意义(P＜0.01).结论 质粒介导的RNA干扰可明显抑制大鼠胸膜间皮细胞AQP1基因的表达,且抑制率具有序列相关性,是潜在的胸腔积液基因治疗新方法.